脂肪酶(LPS)检测试剂盒 ; 50管/48样

脂肪酶(LPS)检测试剂盒 ; 50管/48样

测定意义： 

LPS 又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS 广泛的存在于各种生物中。血清中 LPS 的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。

测定原理： 

LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。

需自备的仪器和用品：

研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、甲苯 100mL 、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体90mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体14mL×1瓶，4℃保存。每次使用前用震荡混匀器剧烈震荡 20min。

试剂三：甲苯100mL×1瓶，4℃保存(自备)。

试剂四：液体20mL×1瓶，4℃保存。

标准品：液体 10μL×1瓶，10 µmol/mL 的标准溶液，4℃保存。临用前加入 3.168 mL  甲苯，充分溶解。

粗酶液提取：

1、组织：按照组织质量(g)：试剂一体积(mL)为 1 : 5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。12000g ，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒， 间隔 7 秒，总时间 3min）；然后12000g ，4℃ , 离心 10min，取上清置于冰上待测。

3、血清等液体:  直接检测。

LPS测定操作：

1、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 710 nm，蒸馏水调零。

2、试剂一和试剂二置于 37℃水浴预热30min 以上。

3、5mL EP 管中依次加入下列试剂。

LPS活性计算公式：

1、组织、细菌或细胞LPS活性

(1) 按照蛋白浓度计算

      活性单位定义:

      37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

      LPS (μmol/min/mg prot) = [C标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)] ×V 反总÷(Cpr×V样)÷T=16×[(A测定管－

      A空白管)÷(A标准管- A空白管)]÷Cpr

(2) 按照样本质量计算

      活性单位定义：

      37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。

      LPS (μmol/min/g鲜重) = [C标准品×(A测定管-A空白管)÷（A标准管- A空白管)]×V 反总÷(W×V 样÷V样总)÷T=16×[(A测定管－

      A空白管)÷(A标准管- A空白管)]÷W

(3) 按照细菌或者细胞数量计算

      活性单位定义：

      37℃中每 10⁴个细胞每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

      LPS (μmol /min/10⁴cell) = [C标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)]×V反总÷(细胞数量×V样÷V 样总)÷T=16×[(A测

      定管－A空白管)÷（A标准管- A空白管）]÷细胞数量

2、血清等液体 LPS 活性

      活性单位定义：

      37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。

      LPS (μmol /min/mL) = [C标准品×(A测定管－A空白管)÷(A标准管- A空白管)]×V 反总÷V样÷T =16×[(A测定管－A空白管)÷(A标

      准管- A 空白管)]C 标准品：10 µmol/mL；V反总：反应总体积，2mL；V 样：反应中加入样本体积，0.125mL；V样总:加入提取

      液体积，1mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL ，需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；W：样本质量，

      g；T：催化反应时间，10 min。