脂肪酶(LPS)检测试剂盒 ; 100T/96S

脂肪酶(LPS)检测试剂盒 ; 100T/96S

测定意义： 

LPS 又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS 广泛的存在于各种生物中。血清中 LPS 的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。

测定原理： 

LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算 LPS 活性。

需自备的仪器和用品：

研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪、甲苯 80mL、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体 65mL×2瓶，4℃保存。

试剂二：液体 10mL×1瓶，4℃保存。每次使用前用震荡混匀器剧烈震荡 20min。

试剂三：甲苯80mL×1瓶，4℃保存(自备)。

试剂四：液体10mL×1瓶，4℃保存。

标准品：液体 10μL×1瓶，10 µmol/mL 的标准溶液，4℃保存。临用前加入 3.168 mL  甲苯，充分溶解。

粗酶液提取：

1、组织：按照组织质量(g)：试剂一体积(mL)为 1 : 5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。12000g ，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒， 间隔7秒，总时间3min）；然后12000g ，4℃, 离心10min，取上清置于冰上待测。

3、血清等液体:  直接检测。

LPS测定操作：

1、分光光度计/酶标仪预热30min ，调节波长到710nm，蒸馏水调零。

2、试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min以上。

3、 在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂

注 意：空白管和标准管只需测定一次。

LPS活性计算公式：

1、组织、细菌或细胞LPS活性

(1)  按照蛋白浓度计算

      活性单位定义:

      37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

      LPS (μmol/min/mg prot) = [C标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)]×V反总÷(Cpr×V样)÷T=16×[(A测定管－A空白

      管)]÷Cpr

(2)  按照样本质量计算

      活性单位定义：

      37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

      LPS (μmol/min/g鲜重) = [C标准品×(A测定管-A空白管)÷（A标准管- A空白管)]×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T=16×[(A测定管－A

      空白管)÷(A标准管- A空白管)]÷W

(3) 按照细菌或者细胞数量计算

      活性单位定义：

      37℃中每 10⁴个细胞每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

      LPS (μmol /min/10⁴cell) = [C标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)]×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T=16×[(A测

      定管－A空白管)÷(A标准管- A空白管)]÷细胞数量

2、血清等液体LPS活性

      活性单位定义：

     37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

      LPS (μmol /min/mL) = [C标准品×(A测定管－A空白管)÷(A标准管- A空白管)]×V 反总÷V样÷T =16×[(A测定管－A空白管)÷(A标

      准管- A 空白管)]C 标准品：10 µmol/mL；V反总：反应总体积，0.8mL；V 样：反应中加入样本体积，0.05mL；V样总:加入提

      提取液体积，1mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL ，需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；W:样本质

      量，g；T：催化反应时间，10 min。