脂肪酸合成酶(FAS)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
FAS 是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶 A 和丙二酰辅酶A而生成长链脂肪酸。FAS 普遍表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。
测定原理：
FAS 催化乙酰 CoA、丙二酰CoA和NADPH生成长链脂肪酸和NADP⁺；NADPH在 340nm有吸收峰，而NADP⁺没有；通过测定340nm光吸收下降速率，计算FAS活性。
需自备的仪器和用品：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 25mL×1瓶，－20℃保存。用前1d取出置于4℃充分解冻后混匀。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入550μL 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入550 μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入1050μL 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量(g)：试剂一体积(mL)为 1 : 5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。12000g ，4℃离心40min，取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒， 间隔7秒，总时间3min）；然后12000g ，4℃, 离心40min，取上清置于冰上待测。
3、血清等液体: 直接测定。
FAS测定操作：
1、分光光度计预热30min ，调节波长到340nm，蒸馏水调零。
2、试剂四置于40℃水浴中预热30min。
3、测定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、20μL试剂二、20μL试剂三、820μL试剂四和40μL试剂五，迅速混匀后于340nm处测定吸光值，记录第30s和90s时吸光值，分别记录为A1和A2。△A 测=A1-A2。
FAS活性计算公式：
(1) 按照蛋白浓度计算
活性单位定义:
37℃中每毫克蛋白每分钟钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。
FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×10⁹) ÷(Cpr×V样)÷T=1608×△A÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
活性单位定义：
37℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。
FAS(nmol/min/g 鲜重) = (△A÷ε÷d×V反总×10⁹) ÷(W×V样÷V样总)÷T=1608×△A ÷W
(3) 按细胞数量计算
活性单位定义：
37℃中每10⁴个细胞每分钟氧化1nmol NADPH为1个酶活单位。
FAS(nmol /min/10⁴cell) = (△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷(细胞数量×V 样÷V样总)÷T=1608×△A ÷细胞数量
(4) 按液体体积计算
活性单位定义：
37℃中每毫升样本每分钟氧化1nmol NADPH为1个酶活单位。
FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷V 样÷T=1608×△Aε : NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³/mol/cm； d:比色皿光
径，1 cm；V 反总：反应体系总体积，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W:样本质量，g；V 样:加入反应体
系中上清液体积，100μL=0.1 mL；T：反应时间，1min。
