脂肪酸合成酶(FAS)检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义：
FAS 是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A而生成长链脂肪酸。FAS普遍表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。
测定原理：
FAS 催化乙酰 CoA 、丙二酰CoA和NADPH 生成长链脂肪酸和 NADP+ ；NADPH 在340nm有吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm光吸收下降速率，计算 FAS 活性。
需自备的仪器和用品：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 100mL×1 瓶，－20℃保存。用前 1d 取出置于 4℃充分解冻后混匀；
试剂二：粉剂×1瓶。临用前加入 440μL 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1瓶， 4℃保存。临用前加入 440μL 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：液体 20mL×1 瓶, 4℃保存。
试剂五：粉剂×1瓶， 4℃保存。临用前加入 840μL 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。12000g ，4℃离心40min，取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒， 间隔 7 秒，总时间3min）；然后12000g ，4℃, 离心40min，取上清置于冰上待测。
3、血清等液体：直接测定。
FAS测定操作：
1、分光光度计/酶标仪预热30min ，调节波长到340 nm，蒸馏水调零；
2、试剂四置于 40℃水浴中预热 30 min。
3、在96孔板或EP管中依次加入 20μL上清液、4μL试剂二、4μL试剂三、164μL试剂四和8μL试剂五，混匀后于340nm处测定吸光值，记录第30s和90s时吸光值，分别记录为A1和A2 。△A 测=A1-A2。
FAS活性计算：
a、使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1 、按照蛋白浓度计算
活性单位定义：
37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷(Cpr×V 样)÷T=1608×△A÷Cpr
2、按照样本质量计算
活性单位定义：
37℃中每克组织每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS(nmol/min/g鲜重) = (△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷(W×V 样÷V样总)÷T=1608×△A÷W。
3、按细胞数量计算
活性单位定义：
37℃中每 10⁴个细胞每分钟氧化1nmol NADPH为1个酶活单位。
FAS(nmol /min/10⁴cell) = (△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=1608×△A÷细胞数量。
4、按液体体积计算
活性单位定义：
37℃中每毫升样本每分钟氧化 1nmol NADPH为1个酶活单位。
FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷V 样÷T=1608×△Aε ：NADPH 摩尔消光系数， 6.22×10³L/mol/cm ；d:比色皿
光径，1 cm ；V 反总： 反应体系总体积， 200μL=2×10-⁴L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W:样品质量；V 样:加入反应体
系中上清液体积， 20μL=0.02 mL；V 样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，1min。
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
1、按照蛋白浓度计算
活性单位定义：
37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反总×10⁹)÷(Cpr×V 样)÷T=3216×△A÷Cpr
2、按照蛋白浓度计算
活性单位定义：
37℃中每克组织每分钟氧化 1nmol NADPH为1个酶活单位。
FAS(nmol/min/g 鲜重) = (△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷(W×V 样÷V 样总)÷T=3216×△A÷W
3、按细胞数量计算
活性单位定义：
37℃中每 10⁴个细胞每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS(nmol /min/10⁴cell) = (△A÷ε÷d×V 反总×10⁹)÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=3216×△A÷细胞数量
4、按液体体积计算
活性单位定义：
37℃中每毫升样本每分钟氧化 1nmol NADPH为1个酶活单位。
FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V 反总×10⁹ )÷V 样÷T=3216×△Aε ：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm ；d:96孔板
光径，0.5 cm ；V 反总：反应体系总体积， 200μL=2×10-⁴L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W:样品质量；V 样:加入反应
体系中上清液体积， 20μL=0.02 mL；V 样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，1min。
