游离脂肪酸含量(FFA)检测试剂盒 ; 100T/48S
测定意义:
FFA 既是脂肪水解的产物,又是脂肪合成的底物。FFA 的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关,也可反映食物贮藏中的品质变化。
测定原理:
在弱酸性条件下,FFA与铜盐反应生成铜皂,在715nm处有特征吸收峰,在一定范围内游离脂肪酸含量与显色程度呈线性关系。
需自备的仪器和用品:
研钵、台式离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。
试剂组成和配制:
试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体20mL×1瓶,4℃保存。
样品中FFA提取:
组织用蒸馏水冲洗干净后,用吸水纸吸取表面水分,捣碎后按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)加入试剂一,震荡提取3h,8000g,4℃离心 10min,取上清液待测。
测定操作:
1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到715nm。
2、对照管:取上清液 0.4mL,加0.2mL试剂二,充分震荡5min,室温静置5min,取上层 200μL于微量石英比色皿/96孔板,调零。
3、测定管:取上清液0.4mL,加0.2mL试剂三,充分震荡 5min,室温静置5min,取上层 200μL于微量石英比色皿/96孔板,测定吸光值,记为A。
FFA含量计算公式:
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y=0.0075 x+ 0.0055,R²=0.994
(1) 按样本蛋白浓度计算
FFA(nmol/mg prot)= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1×Cpr)=133×(A-0.0055)÷Cpr
(2) 按样本质量计算
FAS(nmol/鲜重) =(A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1÷V2×W)=133×(A-0.0055)÷WV1:加入样本体积,0.4mL;V2:提取液体
积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样品质量,g。
b. 使用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y=0.0038 x+ 0.0055,R²=0.994
(1) 按样本蛋白浓度计算
FFA(nmol/mg prot)=(A-0.0055)÷0.0038×V1÷(V1×Cpr)=266×(A-0.0055) ÷Cpr
(2) 按样本质量计算
FFA(nmol/g鲜重)=(A-0.0055)÷0.0038×V1÷(V1÷V2×W)=266×(A-0.0055)÷WV1:加入样本体积,0.4mL;V2:提取液体积,
1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g。
注意事项:
1、蛋白含量不可直接用提取的上清液直接测定,可用蒸馏水或缓冲液或生理盐水选用本公司的 BCA 法蛋白含量测定试剂盒。
2、最低检出限为2nmol/mL。