游离脂肪酸含量(FFA)检测试剂盒 ; 100管/96样
(可测血清/动物组织/微生物)
测定意义：
游离脂肪酸，也称为非酯化脂肪酸，在与白蛋白结合的血浆中循环。动物血液中的游离脂肪酸 (FFA )含量是一项重要的生理生化指标。血清中游离脂肪酸的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关，游离脂肪酸的浓度会因为糖尿病、重症肝障碍、甲状腺功能亢进等疾病而上升。
测定原理：
用有机溶剂萃取 FFA。含有FFA的有机液与三乙醇胺铜反应,在有机相中形成脂肪酸铜 (铜皂) FFA 一 Cu。Cu 离子与显色液反应形成紫红色络合物。反应形成的颜色深浅与 Cu 离子浓度的关系符合朗伯一比尔定律，因此可利用此反应进行比色。
需自备的仪器和用品：
酶标仪、离心机、可调式移液器、96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：
萃取液：液体120mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体15mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体15mL×1瓶，4℃保存；
试剂四：液体12mL×1瓶，4℃保存；
样本前处理：
1、动物组织：按照动物组织质量（g）：萃取液mL为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL萃取液），进行冰浴匀浆。震荡提取15min，5000 rpm 4℃离心5min，取有机相待测。
2、血清：吸取50μL血清样本，加入1 mL萃取液，震荡提取15 min后，4℃，5000rpm 离心5 min，取有机相待测
3、微生物、细胞：按照细胞数量(10⁴个)：萃取液体积(mL)为 500~1000：1 的比例（建议500万细胞加入1 mL萃取液）加入萃取液，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声2秒，间隔3秒，总时间3min）；震荡提取15min，然后5000rpm 4℃离心5min，取有机相待测。
注 意：有机相待测液可能存在于上层，也可能存在于下层，注意观察，体积较多的那一层即为有机相待测液。
测定步骤：
1、酶标仪预热30min以上，调节波长至550nm。
2、工作液的配制：临用前根据用量按照试剂一(V)：试剂二（V）：试剂三(m)=1(mL)：1(mL)：0.66(g)的比例充分混匀。(注意：现用现配，用多少配多少，在空瓶中配制，试剂盒中带有4个空瓶，先将试剂一与试剂二混合，最后再加入试剂三粉剂)。
3、测定管：吸取600μL样本，加入200μL工作液，盖紧后震荡20 min，4℃，5000rpm离心5 min，分层后取200μL上层有机相，加入100μL试剂四，摇匀，10 min后测定550 nm的吸光值，记为A测定。
4、空白管：吸取600μL萃取液，加入200μL工作液，盖紧后震荡20 min，4℃，5000 rpm离心5 min，分层后取200μL上层有机相，加入100μL试剂四，摇匀，10 min后测定550 nm的吸光值，记为A空白。空白管只需测一次。△A=A测定-A空白
注 意：
1、有机溶剂易挥发，加入96孔板后应尽快检测。
2、测定管中加入的样本即样本前处理中的有机相待测液
FFA含量计算：
标准曲线：y = 0.0161x - 0.0141 R2 = 0.9985 x：棕榈酸标准品浓度(nmol/mL)y：吸光值差值△A
1、血清 FFA 含量计算
FFA含量(μmol/mL)=(△A+0.0141)÷0.0161×V1÷(V3×V1÷V2)÷1000=1.242×(△A+0.0141)
2、动物组织、微生物、细胞中 FFA 含量计算
(1) 按样本蛋白浓度计算
FFA 含量(μmol/g 鲜重)=(△A+0.0141)÷0.0161×V1÷(W×V1÷V2)÷1000=0.062×(△A+0.0141)÷W
(2) 按样本蛋白浓度计算
FFA 含量(μmo/mg prot)= (△A+0.0141)÷0.0161×V1÷(V1×Cpr)÷1000=0.062×(△A+0.0141)÷CprV1：加入样本体积,0.6mL；
V2：萃取液体积，1mL；V3：加入血清(浆)体积，0.05 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：动物组织样品质量，g；
1000：1μmol=1000 nmol
注意事项：
1、蛋白含量不可直接用提取的上清液直接测定，可用蒸馏水或缓冲液或生理盐水选用本公司的 BCA 法蛋白含量测定试剂盒。
2、最低检出限为20nmol/mL。
