UDPG焦磷酸化酶(UPG)检测试剂盒 ; 50管/48
样测定意义：
UDPG 焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的关键酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将 1-磷酸葡萄糖与 UTP 分子合成为 UDP-葡萄糖（UDPG）。
测定原理：
UGP 可逆催化反应生成 1 磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将 NADP 转化为NADPH ，340nm 的吸光值增加速率反映了 UGP 活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
酶液提取：
1、组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g ，
加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃, 10000g 离心 10min，取上清置冰上待测。
2、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 4℃ , 10000g离心 10min，取上清置冰上待测。
3、液体：直接检测。
测定操作：
1、分光光度计预热 30min ，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、取 1mL 石英比色皿，依次加入 500μL 试剂一，100μ L 试剂二，100μ L 试剂三，100μ L 试剂四，100μ L 试剂五，100μL 粗酶液，充分混匀，记录 340nm 处 30s 的吸光值 A1 和 330s 的吸光值 A2，△A=A2-A1
计算公式：
(1) 按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP(nmol/min /mg prot)＝[ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T=321.54× ΔA÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
酶活单位定义：
每克组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADP 定义为一个酶活力单位。
UGP(nmol/min/g鲜重)＝[ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹]÷(W×V 样÷V样总)÷ T=321.54×ΔA÷W
(3) 按照细胞数量计算
酶活单位定义：
每 10⁴个细胞每分钟消耗1nmol的 NADP定义为一个酶活力单位。
UGP(nmol/min /10⁴cell)= [ΔA÷(ε×d)×V 反总×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.643×ΔA。
(4) 按照液体体积计算
酶活单位定义:
每毫升液体每分钟消耗 1nmol的NADP 定义为一个酶活力单位。
UGP(nmol/min/mL)＝[ΔA÷(ε×d)×V 反总×10⁹]÷V 样÷T=321.54×ΔAV 反总：反应体系总体积,1×10-3 L;ε :NADPH 摩尔消光
6.22×10³ L / mol /cm;d：比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL;T：反应时间,系5min
Cpr：样本蛋白质浓度,mg/mL；W：样本质量，g ；500：细胞或细菌总数，500 万。
