UDPG焦磷酸化酶(UPG)检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义：
UDPG 焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的关键酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将 1-磷酸葡萄糖与 UTP 分子合成为 UDP-葡萄糖（UDPG）。
测定原理：
UGP 可逆催化反应生成 1 磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将 NADP 转化为NADPH ，340nm 的吸光值增加速率反映了UGP活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：液体 2mL×1 瓶，4℃保存。
酶液提取：
1、组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g ，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃, 10000g 离心 10min，取上清置冰上待测。
2、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 4℃ , 10000g离心 10min，取上清置冰上待测。
3、液体：直接检测。
测定操作：
1、紫外分光光度计/酶标仪预热30min ，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、取微量石英比色皿/96 孔板，依次加入 100μL 试剂一，20μ L 试剂二，20μL 试剂三，20μL 试剂四，20μ L试剂五，20μL 粗酶液，充分混匀，记录 340nm 处 30s 的吸光值 A1 和 330s 的吸光值 A2，△A=A2-A1
计算公式：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1) 按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：
每毫克组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T=321.54×ΔA÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
酶活单位定义：
每克组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADP 定义为一个酶活力单位。
UGP(nmol/min /g鲜重）=ΔA÷ (ε×d)×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=321.54×ΔA÷W
(3) 按照细胞数量计算
酶活单位定义：
每 10⁴个细胞每分钟消耗1 nmol的NADP 定义为一个酶活力单位。
UGP(nmol/min /10⁴cell)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷ T=321.54×ΔA÷细胞数量
(4) 按照液体体积计算
酶活单位定义：
每毫升液体每分钟消耗1nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP(nmol/min /mL) =ΔA÷(ε×d)×V 反总÷V样 ÷T=321.54×ΔAV 反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADPH摩尔消光系数,
6.22×10³L/ mol /cm;d:比色皿光径, 1cm;V 样：加入样本体积，0.02mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T：反应时间,5 min ;
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL;W:样本质量, g。
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
(1) 按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：
每毫克组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADP 定义为一个酶活力单位。
UGP(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V 样×Cpr)÷T=643.08×ΔA÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
酶活单位定义:
每克组织每分钟消耗1nmol 的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP(nmol/min/g鲜重)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T=643.08×ΔAW
(3) 按照细胞数量计算
酶活单位定义：
每 10⁴个细胞每分钟消耗1nmol的NADP 定义为一个酶活力单位。
UGP(nmol/min /10⁴ cell)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T=643.08×ΔA÷细胞数量
(4) 按照液体体积计算
酶活单位定义：
每毫升液体每分钟消耗 1 nmol 的 NADP 定义为一个酶活力单位。 UGP(nmol/min /mL)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷V ÷T=643.08×ΔA
V 反总：反应体系总体积，0.2mL;ε ：NADPH 摩尔消光系数,6.22×10³L / mol /cm ;d:比色皿光径, 0.5cm;V 样:加入样本
体积, 0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL;T：反应时间，5 min ;Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量,g
