糖原磷酸化酶a(GPa)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
糖原磷酸化酶（Glycogen phosphorylase ，GP ，EC 2.4.1.1)）是糖原分解代谢的关键酶，使糖原分子从非还原端逐个断开 α-1 ，4-糖苷键移去葡萄糖基，释放 1-磷酸葡萄糖，直至临近糖原分子 α-1 ，6-糖苷键分支点前 4 个葡萄糖基处。GP 分为有活性的糖原磷酸化酶 a（GPa）和无活性的糖原磷酸化酶b（GPb）两种形式。糖原的分解主要在 GPa 的催化下进行。
测定原理：
未添加激活剂时，GPa 催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和 1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化 NADP 还原生成 NADPH ，在 340nm 下测定 NADPH 上升速率，即可反映 GPa 活性。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 16 mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶， -20℃保存；
试剂三：粉剂×1支， -20℃保存；
试剂四：粉剂×1支， -20℃保存；
样本的前处理：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定操作：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零；
2、工作液的配制：临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、试剂三的配制：临用前在试剂三管中加入1mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
4、试剂四的配制：临用前在试剂四管中加入1mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
5、将工作液、试剂三和试剂四置于37℃预热 5分钟；
6、在微量石英比色皿或 96孔板中加入10μL 样本、10μL 试剂三、10μL试剂四、10μL蒸馏水和 160μL 工作液，立即混匀，记340nm处5min 后的A1和10min 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A2-A1
GPa 活性计算：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义：
每mg 组织蛋白每分钟产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。GPa(nmol/min/mg prot)＝[ΔA×V÷(ε×d)×10⁹]÷(
V样×Cpr)÷T=643×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位定义：
每g组织每分钟产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
GPa(nmol/min/g鲜重)＝[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W×V样÷V样总)÷T=643×ΔA÷WV反总：反应体系总体积,2×10-4L
ε:NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³L / mol /cm;d：比色皿光径,1cm；V 样：加入样本体积,0.01 mL；V 样总：加入提取液
体积,1mL;T：反应时间,5 min;Cpr：样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下：
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义：
每mg组织蛋白每分钟产生1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。GPa(nmol/min/mg prot)＝[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷
(V样×Cpr)÷T=1286×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位定义：
每g组织每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GPa(nmol/min/g鲜重)＝[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W×V样÷V样总)÷T=1286×ΔA÷WV 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；
ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22× 10³L / mol /cm；d：96 孔板光径, 0.5cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入
提取液体积，1 mL；T：反应时间,5min;Cpr：样本蛋白质浓度,mg/mL;W样本质量,g
