乙醇酸氧化酶检测试剂盒 ; 50管/48样

乙醇酸氧化酶检测试剂盒 ; 50管/48样

测定意义： 

乙醇酸氧化酶（EC1.1.3.15）是植物光呼吸代谢中的关键酶，也是光下合成草酸的关键酶，它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，对研究光呼吸代谢过程及其调控具有重要意义。

测定原理： 

乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和盐酸苯肼反应生成乙醛酸苯腙，在 324nm 有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：

天平、低温离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿。

试剂组成和配制：

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 35mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存，临用前加 10mL 双蒸水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

酶液提取：

按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。12000g ， 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定操作表：

酶活性计算公式：

1、按照蛋白浓度计算

      酶活性定义：

      每毫克蛋白每分钟氧化 1 nmol 乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。

2、按照样本质量计算

      酶活性定义：

      每克组织每分钟氧化 1 nmol 乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。

      ε ：乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数：17L/mmol/cm ；d：比色皿光径，1cm ；V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应中样本

      体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量， g；T：反应时间，3min。

注意事项：

1、测定之前进行预实验，若吸光值较高，请将样品用提取液进行适当的稀释再测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

2、色素含量较高的样品，可在提取酶时加活性炭吸附。