乙醇酸氧化酶检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义：
乙醇酸氧化酶（EC1.1.3.1 ）是植物光呼吸代谢中的关键酶，也是光下合成草酸的关键酶，它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，对研究光呼吸代谢过程及其调控具有重要意义。
测定原理：
乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和盐酸苯肼反应生成乙醛酸苯腙，在 324nm 有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存，临用前加 5mL 双蒸水溶解；用不完的试剂分装后–20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：液体 2mL×1 支，4℃保存。
酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。12000g ， 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定操作表：
| 测定管 |
样本(μL） | 10 |
试剂一 (μL） | 130 |
试剂二 (μL） | 40 |
试剂三 (μL） | 20 |
充分混匀，立即于微量石英比色皿/96 孔板中测定 324nm 处 10s和 190s 吸光值 A1 和 A2，△A=A2 – A1 |
酶活性计算公式：
a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、按照蛋白浓度计算
酶活性定义：
每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol 乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
2、按照样本质量计算
酶活性定义：
每克组织每分钟氧化 1 nmol 乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
ε ：乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数：17L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体
积, 0.2mL；V 样：反应中样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白
浓度，mg/mL；W，样本质量, g；T：反应时间，3min
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、按照蛋白浓度计算
酶活性定义：
每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol 乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
2、按照样本质量计算
酶活性定义：
每克组织每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
ε:乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数：17L/mmol/cm ；d：比色皿光径，0.5cm ；V 反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样本
体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，3min。
注意事项：
1、测定之前进行预实验，若吸光值较高，请将样品用提取液进行适当的稀释再测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
2、色素含量较高的样品，可在提取酶时加活性炭吸附。
