果糖1，6-二磷酸醛缩酶(FDA)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
植物叶绿体中果糖 1,6-二磷酸醛缩酶是光合作用中参与calvin 循环的重要酶。催化果糖 1,6-二磷酸和景天庚酮糖 1,7-二磷酸的合成反应，在各种逆境胁迫下表现不同的响应。
测定原理：
果糖 1,6-二磷酸醛缩酶催化果糖 1,6-二磷酸生成 3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮，在磷酸丙糖异构酶和 α-磷酸甘油脱氢酶作用下催化 NADH 和磷酸二羟丙酮生成 NAD 和α-磷酸甘油，340nm 处吸光值的变化可反映果糖 1,6-二磷酸醛缩酶活性的高低。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、震荡仪、研钵、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿。
试剂组成和配制：
提取液一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
提取液二：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：液体×1 瓶，4℃避光保存；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
酶液提取：
①总 FDA 酶提取：建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W ，破碎3s ，间歇 7s ，总时间 1min），然后 4℃ , 8000g 离心 10min，取上清测定。
②胞浆和叶绿体 FDA 酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5～10 的比例（建议称取约0.1g 样本，加入 1mL 提取液一），冰浴匀浆后于 4℃ , 200g 离心 5min ，弃沉淀，取上清在 4℃ , 8000g 离心10min ，取上清用于测定胞浆 FDA 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s ，间歇 7s ，总时间 1min），然后 4℃ , 8000g 离心 10min ，取上清测定叶绿体中 FDA 酶活性。
建议测定总 FDA 酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的 FDA，则按照步骤②提取粗酶液。
测定操作：
1、分光光度计预热 30min ，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、取1mL 石英比色皿，依次加入 500μL 试剂一，100μ L 试剂二，100μ L 试剂三，100μ L 试剂四，100μ L 试剂五，100μL 粗酶液，充分混匀，记录 340nm 处 10s 的吸光值 A1 和 310s 的吸光值 A2，△A=A1-A2。
计算公式：
(1) 按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：
每毫克组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADH 定义为一个酶活力单位。 FDA(nmol/min /mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(
V 样 ×Cpr)÷T=321.54×ΔA÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
酶活单位定义：
每克组织每分消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
FDA(nmol/min /g鲜重）= ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
(3) 按照细胞数量计算
酶活单位定义：
每10⁴个细胞每分钟消耗 1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 FDA(nmol/min /10⁴cell）= ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×细
胞数量÷V样总) ÷T= 321.54×ΔA÷细胞数量
(4) 按照液体体积计算
酶活单位定义：
每毫升液体每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。 FDA(nmol/min /mL)= ΔA÷ (ε×d)×V 反总÷V
样÷T=321.54×ΔAV 反总：反应体系总体积，1mL；ε ：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm;
V样：加入样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间,5 min;Cpr：样本蛋白质浓度,mg/mL;W：样本
质量，g。
