果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(FDA)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
植物叶绿体中果糖 1,6-二磷酸醛缩酶是光合作用中参与 calvin 循环的重要酶。催化果糖1,6-二磷酸和景天庚酮糖 1,7-二磷酸的合成反应，在各种逆境胁迫下表现不同的响应。
测定原理：
果糖 1,6-二磷酸醛缩酶催化果糖 1,6-二磷酸生成 3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮，在磷酸丙糖异构酶和 α-磷酸甘油脱氢酶作用下催化 NADH 和磷酸二羟丙酮生成 NAD 和 α-磷酸甘油， 340nm 处吸光值的变化可反映果糖 1,6-二磷酸醛缩酶活性的高低。
自备实验用品及仪器：
天平、震荡仪、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。
试剂组成和配制：
提取液一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
提取液二：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 2 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 2 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装
后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：液体 2mL×1 瓶，4℃避光保存。
酶液提取：
①总 FDA 酶提取：建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃，8000g 离心 10min，取上清测定。②胞浆和叶绿体 FDA 酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5～10 的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一），冰浴匀浆后于 4℃，200g 离心 5min，弃沉淀，取上清在 4℃，8000g 离心 10min，取上清用于测定胞浆 FDA 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃，8000g 离心 10min，取上清测定叶绿体中 FDA 酶活性。建议测定总 FDA 酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的FDA，则按照步骤②提取粗酶液。
测定步骤：
1、紫外分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、取微量石英比色皿/96 孔板，依次加入 100μL 试剂一，20μL 试剂二，20μL 试剂三，20μL试剂四，20μL 试剂五，20μL 粗酶液，充分混匀，记录 340nm 处 10s 的吸光值 A1 和 310s的吸光值 A2，△A=A1-A2。
Rubisco 活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1) 按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义:
每毫克组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FDA(nmol/min/mgprot)= ΔA÷(ε×d)×反总÷(V样×Cpr)÷T=321.54×ΔA÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
酶活单位定义：
每克组织每分消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
FDA(nmol/min/g鲜重)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T=321.54×ΔA÷W
(3) 按照细胞数量计算
酶活单位定义：
每10⁴个细胞每分钟消耗 1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FDA(nmol/min/10⁴cell)= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V样×细胞数量÷V 样总) ÷T= 321.54×ΔA÷细胞数量
(4) 按照液体体积计算
酶活单位定义：
每毫升液体每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
FDA(nmol/min/mL)= ΔA÷(ε×d)×V 反总÷V 样÷T=321.54×ΔAV反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH 摩尔消光系
数,6.22×10³ L/mol /cmd：比色皿光径，1cm;V样：加入样本体积,0.02mL;V 样总：加入提取液体积,1mL;T：反应时间 ,5 min；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
(1) 按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：
每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol 的NADH 定义为一个酶活力单位。
FDA(nmol/min/mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(V样×Cpr)÷T= 643.08×ΔA÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
酶活单位定义：
每克组织每分消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
FDA(nmol/min/g 鲜重)= ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T= 643.08×ΔA÷W
(3) 按照细胞数量计算
酶活单位定义：
每 10⁴个细胞每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FDA(nmol/min/10⁴cell)= ΔA÷(ε×d）×V 反总÷(V样×细胞数量÷V 样总)÷T= 643.08×ΔA÷细胞数量
(4) 按照液体体积计算
酶活单位定义：
每毫升液体每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
FDA(nmol/min/mL)= ΔA÷(ε×d)×V 反总÷V 样÷T= 643.08×ΔAV 反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH 摩尔消光系
数, 6.22×10³ L / mol /cm； d：比色皿光径，0.5cm;V 样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积, 1mL；T：反应
时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
