乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义：
LDH（EC 1.1.1.27 ）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着 NAD+/NADH 之间互变。
测定原理：
LDH 催化 NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与 2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：30mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂一：液体 15 mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 10μL 试剂五和 1.3 mL 蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂三：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：液体 50 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂五：液体 100μL×1 支，4℃保存；
样品测定的准备：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 1000~5000 ：1 的比例（建议 2000 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W ，超声 3s ，间隔 10s ，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在 EP 管中加入下列试剂）
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
样本 | 50 | 50 |
试剂一 | 250 | 250 |
试剂二 | 50 | |
蒸馏水 | | 50 |
充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 15min |
试剂三 | 250 | 250 |
充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 15min |
试剂四 | 750 | 750 |
充分混匀，室温静置 15 分钟，450 nm 下测定吸光度，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需要设一个对照管。 |
LDH 活力单位的计算：
1、标准条件下测定的回归曲线， y = 0.9108x+0.0037(x 为标准品浓度，umol/mL；y 为ΔA)。
2、血清（浆）LDH 活力的计算
单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（nmol/min/mL）= (ΔA-0.0037）÷0.9108÷T×10³=73.2×ΔA
3、细胞、细菌和组织中LDH 活力的计算
(1) 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH(nmol/min/mg prot)=[ (ΔA-0.0037)÷0.9108×V1]÷(V1×Cpr)÷T×10³=73.2×ΔA÷Cpr需要另外测定，建议使用本公司
BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
(2) 按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH(nmol/min/g 鲜重）=[ (ΔA-0.0037)÷0.9108×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×10³ =73.2×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：
每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH(nmol/min/10⁴ cell)= [ (ΔA-0.0037）÷0.9108×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×10³ =0.037×ΔA
V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积,1 mL;T：反应时间,15 min;Cpr：蛋白质浓度,mg/mL；
W：样本质量，g；2000：细胞或细菌总数，2000 万。
1、标准曲线线性范围为：0.1 umol/mL -2 umol/mL。
2、ΔA 线性范围为：0.01 -2。
