乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
ADH 是生物体内短链醇代谢的关键酶，催化乙醇与乙醛可逆转换，在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物 ADH 主要在肝脏生成，肝脏损伤导致 ADH 释放到血清中。血清 ADH 活性高低反映了肝功能是否异常。
测定原理：
ADH 催化 NADH 还原乙醛生成乙醇和 NAD+ ，NADH 在340nm 处有吸收峰，而 NAD+没有；测定 340nm吸光度下降速率，来计算 ADH 活性。
自备的仪器和用品：
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1瓶，室温保存。
试剂二：液体×1瓶， 4℃保存。
试剂三：粉剂×2 瓶，－20℃保存。临用前加入 22mL 试剂二，现配现用。
试剂四：液体×1支， 4℃保存。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。16000g ，4℃离心20min，取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）;16000g , 4℃离心20min，取上清液置冰上待测。
3、血清等液体：直接测定。
ADH 测定操作：
1、分光光度计预热 30 min ，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。
2、试剂三在 25℃水浴中保温 30 min。
3、在1mL石英比色皿中依次加入100μL 样本上清液、800μL试剂三和100μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s 和75s 时吸光值，分别记为 A1 和 A2 。△A 测定管=A1-A2。
计算公式：
(1) 按照蛋白浓度计算
活性单位定义：
25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADH为1个酶活单位。
ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷(Cpr×V 样)÷T=1608×△÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
活性单位定义：
25℃中每克组织每分钟氧化 1nmol NADH 为 1个酶活单位。
ADH (nmol/min/g 鲜重) =(△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷(W×V 样÷V 样总)÷ T=1608×△A÷W
(3) 按细胞数量计算
活性单位定义：
25℃中每 10⁴个细胞每分钟氧化 1nmol NADH为1个酶活单位。
ADH (nmol/min/10⁴cell) =(△A÷ε÷d×V反总×10⁹)÷(细胞数量×V样÷V样总)÷ T=1608×△A ÷细胞数量
(4) 按液体体积计算
活性单位定义：
25℃中每毫升血清每分钟氧化 1nmol NADH为1个酶活单位。
ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷V 样÷T=1608×△Aε ：NADH 摩尔消光系数 ，6.22×10³L/mol/cm ；d： 比
色皿光径, 1 cm ；V 反总 ：反应体系总体积, 1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白质浓度，mg/mL;W：样本质量,g;V 样：加入反
应体系中上清液体积，100μL=0.1 mL；T：反应时间，1min。
