土壤谷氨酰胺酶(S-GLS)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
GLS（EC3.5.1.2）存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
测定原理：
S-GLS 催化谷氨酰胺水解成 L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。
需自备的仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵、甲苯、冰和双蒸水。
试剂组成和配制：
试剂一×1 瓶，15 mL ，4 ℃保存；
试剂二×1 瓶，40 mL ，4 ℃保存；
试剂三×1 瓶，60 mL，常温保存；
试剂四×1 瓶，5 mL，常温保存；
试剂五×1 瓶，3 mL，常温保存；
试剂六×1瓶，3 mL，常温避光保存。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 420nm，蒸馏水调零。
2、样品测定（在EP管中加入下列试剂）
试剂名称（uL） | 测定管 | 对照管 |
样本 | 0.1 | |
甲苯 | 25 | 25 |
振荡混匀，室温放置 15min |
试剂一 | 100 | 100 |
试剂二 | 400 | 400 |
混匀，37℃水浴2小时 |
试剂三 | 525 | 525 |
混匀，8000 g ，25℃离心 10 min；取上清液，依次加入下列试剂 |
上清液 | 130 | 130 |
试剂四 | 30 | 30 |
试剂五 | 20 | 20 |
试剂六 | 20 | 20 |
混匀，室温静置 15min ，420nm 处读取测定管和对照管吸光值，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。对照管只要做一管。 |
注 意：试剂六如出现沉淀，静置后取上清使用。
酶活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 3.8488x+0.0057；x 为标准品浓度(μmol/mL），y 为吸光值 A。
单位定义：
每 g 土样每 min 催化谷氨酰胺生成1nmol氨定义为一个酶活力单位。
S-GLS（nmol/min/g土样）＝(ΔA-0.0057)÷3.8488×V反总÷W÷T=2.27×(ΔA -0.0057)÷W。V 反总：反应体系总体积：
1.05mL；T：反应时间，2h=120min ；W：样本质量，g; 1000 ，μmol 到 nmol 换算系数。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 1.9244x+0.0057；x 为标准品浓度(μmol/mL），y 为吸光值 A。
单位定义：
每 g 土样每 min 催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
S-GLS（nmol/min/g土样）＝(ΔA-0.0057)÷1.9244×V反总÷W÷T=4.55×(ΔA -0.0057)÷W。V 反总：反应体系总体积：0.525mL；T：反应时间，2h=120min ；W：样本质量，g; 1000 ，μmol 到 nmol 换算系数。
