铁离子还原能力检测试剂盒/48样
测定意义：
抗氧化物可以还原 Fe³+- 三吡啶三吖嗪(Fe³+-TPTZ)产生蓝色的 Fe2+-TPTZ, 随后在590nm 测定蓝色的 Fe²+-TPTZ 即可获得样品中的铁离子还原能力，吸光值越高表示样品的还原能力越强。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 液体45mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂二 | 液体4.5mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂三 | 液体4.5mL×1瓶 | 4℃保存 | |
标准品 | 粉体mg×1支 | 4℃保存 | 若重新做标曲，则用到该试剂。 |
所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径1cm)、恒温水浴锅、低温离心机、可调式移 液器、研钵、蒸馏水。
铁离子还原能力测定：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备：
① 组织样本：称取0 . 1g 样本(若是干样可取0.02-0.05g), 加 入 1mL 的80%乙醇(自备)进行匀浆，匀浆后转入2mL离心管中；于60℃,200-300W 条件下超声提取30min ( 间 隔 5min振荡混匀一次)。12000rpm, 离 心 1 0min, 取上清，置冰上待测。
② 液体样本：水溶性样本可直接检测。若是油性样本，可用80%乙醇溶解后再取上清检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热30min, 调节波长至590nm, 蒸馏水调零。
② 显色液配置：将试剂一、试剂二、试剂三按10:1:1 的比例混合，使用前37℃预温，现配现用，注意避光。
③ 不同样本抗氧化能力不一，可先选取2个样本做检测，若 A 测定超过2,需对样本
用80%乙醇稀释，稀释倍数 D 代入公式计算。
④ 在 EP 管中依次加入：
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
样本 | 20 | 0 |
蒸馏水 | 100 | 120 |
显色液 | 680 | 680 |
混匀，室温25℃准确反应10min,全部液体转移至1mL玻璃比色皿中， 于590nm处读取吸光值A;△A=A测定 -A空白。 |
注: 若 A 测定值超过2,可对样本用提取液进行稀释，或减少样本上样量 V1 (如减至 1 0 μL, 则提取液增至110μL), 则稀释倍数 D 或加样量 V1 需代入公式重新计算。2、若△A 的值在零附近，可增加样本量 V1 (如增至40μL, 则蒸馏水相应减少)则改变后的 V1需代入公式重新计算。
结果计算：
1、标准曲线方程：
y=0.5138x-0.0011,x 是标准品 (FeSO4)摩尔浓度(μmol/mL),y是△A。
2、组织样本：
(1) 按样本质量计算：
铁离子还原能力(μmol FeSO4/g 重量)=[(△A+0.0011)÷0.5138×V1]÷(V1÷V×W) =1.95×(△A+0.0011)÷W×D
(2) 按样本蛋白浓度计算：
铁离子还原能力(μmol FeSO4/mg prot)=[(△A+0.0011)÷0.5138×V1]÷(V1×Cpr) =1.95×(△A+0.0011)÷Cpr×D
3、液体样本：
铁离子还原能力(μmol FeSO4/mL)=[(△A+0.0011)÷0.5138×V1]÷V1×D =1.95×(△A+0.0011)×DV----加入 提取液体积，1 mL;V1---- 反应 中样品体积，20μL=0.02 mL;W---- 样品质量，g;D--- 稀释倍数，未稀 释即为1;Cpr----样本蛋白浓度，mg/mL, 建议使用本公司的 BCA 蛋白 含量检测试剂盒。
注:
1、由于本方法是显蓝色测定吸光值，因此尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近
蓝色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。
2、 样本中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还 原反应的还原剂。
3、如果样品测定出来的吸光值在标准曲线范围以外，需把样品适当稀释或浓缩后再进行测定。
4、如果样本中处理过程中施加了较高浓度的铁盐或亚铁盐，会干扰测定，不宜使用本测试方法。
附 ：标准曲线制作过程：
1、制备标准品母液(100μmol/mL): 临用前加1mL 蒸馏水，充分溶解混匀。
2、把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0,0.8,1.6,2.4,3.2,4 μmol/mL。
也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3、按照测定管加样体系操作，依据结果即可制作标准曲线。
