土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义:
土壤芳基硫酸酯酶来自于土壤微生物,能酶促土壤有机硫化物转化为植物可吸收的无机态硫,在硫素的生物化学循环和植物的硫营养代谢中具有重要的作用,是反映土壤质量的一个重要生物学指标。
测定原理:
S-ASF 能够催化对-硝基苯硫酸钾生成对-硝基苯酚,后者在 410nm 有特征光吸收。
自备用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存(自备);
试剂二:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×2 支,-20℃保存;临用前加入 1.25mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂四:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂五:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;
样品处理:
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。
测定步骤:
试剂名称
测定管
对照管
风干土样(g)
0.1
试剂一 (μL)
25
振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置 15min
试剂二(μL)
400
试剂三(μL)
100
蒸馏水(μL)
混匀, 37℃水浴 1h 后
试剂四(μL)
试剂五(μL)
充分混匀,室温静置 2min 后,10000g 25℃离心 10min ,取 800μL 上清液于 410nm 处测定吸光值 A,计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。
S-ASF活力计算:
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0066x -0.013 ;x 为标准品浓度(μmol/L),y 为吸光值。
单位的定义:
每天每g土样中产生1μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-ASF 活力(μmol/d /g土样)= (ΔA+0.013) ÷0.0066×V 反总÷W÷T =19.09×(ΔA+0.013)T:反应时间,1h=1/24d; V 反总:反应体系总体积:5.25×10-4 L;W:样本质量,0.1g。