甲基乙二醛(MG)含量检测试剂盒/96样
测定意义：
甲基乙二醛 (methylglyoxal,MG), 又称丙酮醛，是几种代谢途径产生的副产物，也是 植物受到环境胁迫时产生的一种常见的有毒醛类化合物。高浓度的 MG 是一种细胞毒素， 而低浓度的 MG 作为一种信号分子，调节细胞代谢、种子萌发、植物生长、发育、生殖 等多种生理过程和耐逆性形成的获得，故 MG 具有双重作用。
甲基乙二醛 (MG)和1,2-邻苯二胺反应生成的产物在336nm下有吸收峰，通过检 测该产物在336nm 的值进而计算得出样本中甲基乙二醛(MG)含量。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体100mL×1瓶 | ④℃保存 | |
试剂一 | 粉体×5支 | 4℃保存 | 临用前甩几下使粉体全部落入底部，再加入4mL蒸馏水，混匀备用(应为无色，若变色则需废弃)。 |
标准品 | 液体mL×1支 | 4℃保存 | 若重新做标曲，则用到该试剂。 |
所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板(也可选择 UV 板)、可调式移液器、研钵、蒸馏水。
甲基乙二醛(MG)含量检测：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备：
① 组织样本：称取0.1g 样本，先加入1mL 的提取液，冰浴匀浆，12000rpm,4℃ 离心10min, 取 上清液转移至新的 EP 管中，12000 rpm,4℃ 再次离心10min, 取全部上清液待测。
注 : 若增加样本量，可按照组织质量(g):提取液体积(mL) 为1:5~10的比例进行提取。
② 液体样本：澄清的液体样本直接检测；若浑浊则需12000rpm, 室温离心10min, 取上清液备用。
③ 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率200W, 超 声 3s, 间 隔 1 0s, 重 复 3 0 次 ) ; 12000rpm,4℃ 离心10min, 取上清，置冰上待测。
注: 若增加样本量，可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL) 为500~1000:1 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 酶标仪预热30min 以上，调节波长至336nm。
② 在9 6孔板(也可选择 UV 板)中依次加入下列试剂：
试剂名称(μL) | 测定管 | 空白管 |
试剂一 | 180 | |
蒸馏水 | | 180 |
样本 | 20 | 20 |
混匀，室温静止30min,在336nm处读取吸光值，△A=A测定管 -A对照管(每个样本做一个自身对照)。 |
注 :
1、若A测定值大于1.8,样本可用蒸馏水稀释，稀释倍数D代入计算公式计算。
2、若△A 在零附近，可增加样本取样质量 W(如增加至0.2g), 或增加样本加样量 V1(如增至40μL, 则试剂一相应减少),则改变后的 W和 V1代入计算公式计算。
结果计算：
1、标准曲线方程：
y=0.3844x-0.0085;x为标准品浓度(μmol/mL),y为吸光值△A。
2、按液体体积计算：
甲基乙二醛(MG)含量(μmol/g重量)=[(4A+0.0085)÷0.3844×V1]÷(W×V1÷V)×D =2.6×(△A+0.0085)÷W×D
3、按液体体积计算：
甲基乙二醛(MG)含量(μmol/mL)=(4A+0.0085)÷0.3844×D=2.6×(△A+0.0085)×D
4、按细胞数量计算：
甲基乙二醛(MG) 含量(μmol/10⁴cell)=[(△A+0.0085)÷0.3844×V1]÷(500×V1÷V)×2.6×(△A+0.0085)÷500×D
V--- 样品提取液总体积，1mL;V1--- 测定时所取样本的体积，0.02mL;W--- 样本质量，g;500--- 细胞数量,万；D---自行稀释倍数,未稀释即为1。
附：标准曲线制作过程：
1、制备标准品母液(15μmol/mL):
2、把母液用提取液稀释成六个浓度梯度的标准品：0,0.4,0.8,1.2,1.6,2. μmol/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3、依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
