土壤酸性转化酶(S-AI)检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义:
S-AI在 pH为 4.5~5.0(酸性)条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。
测定原理:
S-AI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在 510nm有特征光吸收,在一定范围内 510nm光吸收增加速率与 AI 活性成正比。
自备用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶, 4℃保存;临用前加入 25mL 试剂一充分溶解备用;用不完的试剂 4℃保存;
试剂三:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;
样品处理:
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过 30~50目筛。
测定步骤和加样表:
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.1 | 0.1 |
试剂一 | | 800 |
试剂二 | 800 | |
混匀, 37℃准确水浴30min ,95℃水浴 10min 左右(盖紧,以防水分散失),流水冷却,充分混匀(以保证浓度不变),10000g 25℃离心 10min,取上清液 |
上清液 | 700 | 700 |
试剂三 | 350 | 350 |
混匀,95℃水浴 10min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀, 510nm 处,蒸馏水调零,记录各管吸光值 A ,如果吸光值大于 2 ,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数) ,ΔA=A 测定-A 对照 |
S-AI 活性计算:
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0016x -0.001 ;x 为标准品浓度(μg/mL),y 为吸光值。
单位的定义:
每天每 g 土样中产生 1mg 还原糖定义为一个 S-AI 活力单位。
S-AI 活力(μg/d /g 土样)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V 反总÷W÷T ÷1000=240×(ΔA+0.001)
V 反总:反应体系总体积:0.8mL;T:反应时间,1/48d; W:样本质量,0.1g;1000 :1mg=1000μg。