土壤淀粉酶(S-AL)检测试剂盒 ; 100T/48S
测定意义:
淀粉酶(EC3.2.1.1 )是催化淀粉水解的一类酶的总称。土壤中的淀粉酶主要来自于微生物,是一种重要的酶制剂,广泛应用于粮食加工、食品、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业。
测定原理:
淀粉酶水解淀粉产生还原糖,可与 3,5-二硝基水杨酸反应生成红棕色物质,在 508nm 处有特征吸收峰,颜色深浅在一定范围内与还原糖量成正比。
需自备的仪器和用品:
天平、水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、甲苯。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 4mL×1 瓶,4℃保存。若出现沉淀析出,需 70℃加热溶解后再用。
试剂三:液体 12mL×1 瓶,4℃保存;
测定操作表:
| 对照管 | 测定管 |
土样(g) | 0.02 | 0.02 |
甲苯(μL) | 10 | 10 |
25℃静置 15min |
试剂一 (μL) | 110 | 50 |
试剂二(μL) | | 60 |
充分混匀,37℃震荡 1h ,8000rpm ,25℃ , 离心 10min |
上清液(μL) | 100 | 100 |
试剂三(μL) | 100 | 100 |
充分混匀,90℃水浴5min ,待冷却后,于微量石英比色皿/96 孔板中测定 508nm 吸光值,分别记为 A 对照管和 A 测 定管,△A=A 测定管-A 对照管 |
计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.2525x - 0.034 ,R² = 0.9917
酶活单位定义:
每 g 土样每天催化生成 1mg 还原糖为一个酶活力单位。
S-AL(mg/d /g 鲜重)= (△A +0.034)÷ 0.2525×V 反总÷W÷T= 10.464× (△A +0.034)÷W
V 反总:反应体系总体积,0.11mL:T:反应时间,1/24d;W:样本质量,g。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.1263x - 0.034 ,R² = 0.9917
酶活单位定义:
每 g 土样每天催化生成 1mg 还原糖为一个酶活力单位。
S-AL(mg/d/g)= (△A +0.034)÷ 0.1263×V 反总÷W÷T=20.928× (△A +0.034)÷W
V 反总:反应体系总体积,0.11mL;T:反应时间,1/24d; W:样本质量,g。