土壤全铁检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义:
铁元素是一种十分重要的植物营养元素,土壤中铁含量直接影响着植物吸收利用以及生长代谢。
测定原理:
在 pH2-9 范围内,盐酸羟胺将三价铁转化为二价铁,与邻菲罗琳反应生成橙红色配合物,在 510nm 有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。
试剂组成和配制:
提取剂:粉剂×1 瓶,4℃保存。
提取液:液体 100mL×4 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 2mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体 6mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 4mL×1 瓶,4℃避光保存。
样品处理:
新鲜土样风干,过100 目筛,按照土壤质量(g):提取剂质量(g)为 1 :4 的比例(建议称取约 0.1g 土样,加入 0.4g 提取剂)缓慢加入提取剂于坩埚中,边加边搅拌均匀,然后在马弗炉中 550℃熔融 10min,然后在 920℃熔融 30min ,趁热取出坩埚,将熔融物转入烧杯,边搅拌边加 4mL 提取液,必要时加盖,从烧杯口加入,防止溶液溅出,溶解 30min 后,5000g ,25℃离心 10min,取上清液待测。
测定操作表:
| 空白管 | 测定管 |
样本(μL) | | 20 |
试剂三(μL) | 20 | 20 |
试剂四(μL) | 60 | 60 |
蒸馏水(μL) | 40 | 40 |
H₂O (μL) | 80 | 60 |
充分混匀,25℃静置 10min ,于 96 孔板测定710 处吸光值 A ,分别记为 A 空白管和 A 测定管,△A=A 测定管-A 空白管 |
计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.1569x -0.0173 ,R² = 0.9992
全铁含量(mg/kg)= (△A+0.0173)÷ 0.1569×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)= 254.94× (△A+0.0173)÷W
V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应体系中加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,4mL, W:样本质量,g
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.0785x -0.0173 ,R² = 0.9992
全铁含量(mg/kg)= (△A+0.0173)÷ 0.0785×V 反总÷(W×V 样÷V样总)= 509.55× (△A+0.0173)÷W
V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应体系中加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积, 4mL,W:样本质量,g。