土壤亚硝酸还原酶(S-NiR)检测试剂盒 ; 100T/48S
测定意义：
土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用中的关键酶之一，参与亚硝酸盐至 NO 的还原反应，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。
测定原理：
亚硝酸还原酶可将 NO₂—还原为 NO ，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的 NO₂—减少，即 540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。
需自备的仪器和用品：
天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、低温离心机。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶， 4℃保存。临用前加 4mL 蒸馏水溶解。
试剂三：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。（如出现沉淀可以70-80℃加热溶解）
试剂四：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。（如出现沉淀可以70-80℃加热溶解）
试剂五：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
工作液：临用前根据用量将试剂四和试剂五以 1:1 的比例混合。
样品处理：
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。
测定操作表：
| 空白管 | 对照管 | 测定管 |
风干土样（g） | | 0.02 | 0.02 |
蒸馏水(μL） | | 40 | |
试剂一 (μL） | 40 | | 40 |
试剂二(μL） | 40 | 40 | 40 |
混匀后，25℃反应 1h |
试剂三(μL） | 40 | 40 | 40 |
充分震荡 30S ，10000rpm ，4℃, 离心 10min |
上清液(μL） | 70 | 70 | 70 |
工作液(μL） | 140 | 140 | 140 |
充分混匀，静置 3min 后测定540nm 处吸光值，分别记为 A 空白管、A对照管、A测定管。空白管只要做一管，每个测定管需设一个对照管。 |
计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 1.5562x+ 0.0088 ，R² = 0.996 ；x 为标准品浓度(μmol/mL），y 为吸光值（A 标准管-A 空白管）。
酶活单位定义：
每g土样每天还原 1μmol NO₂ˉ 的量为一个酶活力单位。
S-NiR (μmol /d /g土样）=[A空白管-(A测定管-A 对照管) -0.0088]÷1.5562×V 标÷W÷T= 0.617×[A 空白管-(A 测定管-A 对照管) -0.0088]÷W
T：反应时间，1h=1/24d；V 标：标准液体积，0.04mL；W：样本质量，g
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.7781x+ 0.0088 ，R²= 0.996 ；x 为标准品浓度(μmol/mL），y 为吸光值（A 标准管-A 空白管）。
酶活单位定义：
每 g 土样每天还原 1μmol NO₂ˉ 的量为一个酶活力单位。
S-NiR (μmol /d /g 土样）=[A 空白管-(A 测定管-A 对照管) -0.0088]÷0.7781×V 标÷W÷T= 1.234×[A 空白管-(A 测定管-A 对照管) -0.0088]÷W
T：反应时间，1h=1/24d；V 标：标准液体积，0.04mL； W：样本质量，g。
注意事项：
1、配制好的工作液3天内使用完。
2、若吸光值超过1.5,将上清液进行适当的稀释后再加入工作液显色,并在计算公式中乘以稀释倍数。
3、严格控制显色时间，否则会对结果有影响。
4、标准曲线线性范围为 0.03μmol/mL-1.5μmol/mL。
5、A 空白管-（A 测定管-A 对照管）线性范围为 0.02-1.5。
