中性、碱性土壤速效磷检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义:
速效磷是土壤中可被植物吸收的磷组分,包括全部水溶性磷、部分吸附态磷及有机态磷,土壤中速效磷是限制植物生长主要因子之一。
测定原理:
用弱碱性提取碱溶性磷和吸附态磷,用钼锑抗比色法测定。
自备实验用品及仪器:
天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、震荡仪。
试剂组成和配制:
提取液:液体 105mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 6mL×1 支,4℃保存。
试剂二: 粉剂×1支, 4℃避光保存。临用前加2mL蒸馏水溶解。用不完的试剂4℃保存。
试剂三: 粉剂×3支, 4℃避光保存。临用前加 1mL 蒸馏水溶解。现配现用。
样本处理:
新鲜土样风干,过 30-50目筛,按照土壤质量(g):提取液体积(mL)为 1:20 的比例(建议称取约0.05g土样,加入1mL 提取液),振荡提取 1h ,10000g,25℃离心 10min,取上清 液待测。
测定操作表:
1、取试剂三一支,加入 1mL 蒸馏水充分溶解待用。
2、显色液的配制(可测50个样):取 EP 管一支,加入 660μL 试剂一,再加入 100μL 试剂二,充分混匀后,再加入 240μL 试剂三,充分混匀待用;配好的显色液应为黄色,若变蓝则为磷污染;显色液必须现配现用;若一次性测不了 50 个样,可按比例缩小各试剂体积。
3、操作表
| 空白管 | 测定管 |
样本(μL) | | 40 |
提取液(μL) | 40 | |
显色液(μL) | 20 | 20 |
H₂O (μL) | 140 | 140 |
充分混匀,25℃静置 30min |
于 1mL 玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定 660nm 处吸光值 A ,分别记为 A 空白管和 A 测定管,△A=A测定管-A 空白管。空白管只要做一管。 |
计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:
y = 0.1164x-0.012,R²= 0.9958,x 为标准品浓度(mg/L),y 为吸光值。
速效磷含量(mg/kg 干重)= (△A+0.012)÷ 0.1164×V 样÷(W×V 样÷V 样总)= 8.591× (△A+0.012)÷W
V 样:加入反应体系中样本体积,0.04mL;V 样总:加入提取液体积,1mL,W:样本质量,约 0.05g
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:
y = 0.0582x-0.012,R²= 0.9958 ,x 为标准品浓度(mg/L),y 为吸光值。
速效磷含量(mg/kg 干重)= (△A+0.012)÷ 0.0582×V 样÷(W×V 样÷V 样总)= 17.182× (△A+0.012)÷W
V 样:加入反应体系中样本体积,0.04mL;V 样总:加入提取液体积,1mL ,W:样本质量,约 0.05g。
注意事项:
1、配好的显色液当天用完,变蓝则不能使用。
2、最低检出限为 0.2μg/mL。