土壤几丁质酶检测试剂盒 ; 100T/48S
测定意义：
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨) ，以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。
测定原理：
几丁质酶水解几丁质产生 N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在 585nm 处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备实验用品及仪器：
天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板，甲苯、蒸馏水仪。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 65mL×1 瓶，4℃避光保存。
样本处理：
新鲜土样风干，过 30-50目筛。
测定操作表：
| 对照管 | 测定管 |
土样（g） | 0.1 | 0.1 |
甲苯(μL） | 15 | 15 |
混匀，25℃静置 15min |
蒸馏水(μL） | 100 | |
试剂一 (μL） | | 100 |
混匀，37℃培养 24h |
蒸馏水(μL） | 200 | 200 |
4000rpm ，4℃, 离心 10min ，取上清 200μL 于新的 EP 管中 |
试剂二(μL） | 20 | 20 |
混匀，沸水浴 5min |
试剂三(μL） | 600 | 600 |
混匀，37℃显色 20min ，取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板中，蒸馏水调零，测定 585nm 处吸光值，记为 A 对照管和 A 测定管，ΔA=A 测定管-A 对照管 |
计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：
y=5.2714x-0.0007 ，R²=0.9989；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值 ΔA。
酶活性定义：
37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
土壤几丁质酶活性(μg/d/g土样)= (ΔA +0.0007)÷5.2714×V 反总÷W÷T×1000= 598×(ΔA +0.0007)
V 反总：反应体系总体积，0.315mL；W：样本质量，0.1g；T：反应时间，1d ；1000 ：1mg/mL=1000μg/mL。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：
y=2.6357x-0.0007,R²=0.9989；x 为标准品浓度(μg/mL）,y 为吸光值 ΔA。
酶活性定义：
37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
土壤几丁质酶活性(μg/d/g 土样)= (ΔA +0.0007)÷2.6357×V 反总÷W÷T×1000= 1195× (ΔA +0.0007)
V 反总：反应体系总体积，0.315mL；W：样本质量，0.1g；T：反应时间，1d ；1000 ：1mg/mL=1000μg/mL。
注意事项：
1、试剂一充分混匀后再使用。
