土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(S-α-Afa)活性检测试剂盒/24样
测定意义：
土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶 (S- α-Afa,EC 3.2.1.55)是一种能够水解非还原呋喃阿拉伯糖残基的糖苷酶类。本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法，S-α-Afa 分解对-硝基苯阿拉伯呋喃糖苷生成对-硝基苯酚 (PNP), 后者在405nm 有大吸收峰，通过测定吸光值升高速率即可得出α-Afa 酶活性大小。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 液体30mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂二 | 粉剂mg×1瓶 | 4℃保存 | 临用前甩几下使粉剂落入底部，再15mL试剂一，充分溶解备用。 |
试剂三 | 液体15mL×1瓶 | 4℃保存 | |
标准品 | 粉剂mg×1支 | 4℃保存 | 若重新做标曲，则用到该试剂。 |
所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径1cm)、 台式离心机、恒温培养箱、分析天平、 可调式移液器、蒸馏水。
土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(S- α -Afa)活性测定：
建议正式实验前选取2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备：
取新鲜土样风干或者37℃烘箱风干，先粗研磨，过40目筛网备用。
注 : 土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热30 min, 调节波长到405 nm, 蒸馏水调零。
② 在离心管中依次加入下列试剂：
③ 在 EP 管中依次加入：
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
土样(g) | 0.1 | 0.1 |
试剂 — | | 500 |
试剂二 | 500 | |
迅速混匀，37℃保温1h(间隔15min振荡混匀一次)。 |
试剂三 | 300 | 220 |
混匀，12000rpm,离心5min,取出全部上清液至1mL玻璃比色皿(光 径 1 cm ) 中,立即于4 05nm下读取吸光值A , △A = A测定- A对照(每个样本需做一个自身对照)。 |
注 :
1、若 A 测定超过1.8,可对后一步的待检测上清液(测定管和对照管)同时进行稀释(用水稀释即可),稀释倍数 D 代入计算公式；
2、若△A 过小，可以增加土样量或延长保温时间(如2h 或更长),重新调整的样本量 W和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。
3、若同时检测同一背景下的土壤样本，此批土壤样本可做一个样本自身对照，节省时间；若是不同背景下的土壤样本(如黑土，红土，黄土等),则每个样本需做一个自身对照，即按照说明书加样表操作即可。
结果计算：
1、标准曲线方程：
y=0.1283x+0.001;x是标准品 PNP 质量(μg),y是△A。
2、活性定义：
在37℃,每小时每克土壤产生1 μg 对-硝基苯酚 (PNP) 定义为1个酶 活单位。
S-α-Afa(μg/h/g土样)=[(△A-0.001)÷0.1283]÷W÷T×D=7.8×(△A-0.001)÷WD
W--- 土壤样品质量，g;D--- 稀释倍数，未稀释即为1;T--- 催化反应时间，1h;PNP相对分子质量---139.11。
附：标准曲线制作过程：
1、制备标准品母液(1mg/mL): 向标准品 EP管里面加入1ml 蒸馏水溶解，若有结晶析出，需37℃水浴至完全溶解。
2、把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0,0.2,0.4,0.6,0.8,1 mg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3、在EP管中直接加入：10μL标准品+490μL试剂—+300 μL试剂三，混匀，全部上清 液转移至1mL 玻璃比色皿(光径1cm) 中，立即于405nm下读取吸光值 A。
4、根据结果制作标准曲线。
