土壤锰过氧化物酶(S-Mnp)检测试剂盒 ; 100T/48S
测定意义:
锰过氧化物酶(EC1.11.1.13 )是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,主要存在于担子菌中,属于木质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物,叠氮化合物、DTT,多环芳烃等。
测定原理:
锰过氧化物酶在 Mn²⁺存在的条件下,将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,在 465nm 有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、震荡仪、甲苯。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 12mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 2mL×1 支,4℃保存。
试剂三:液体 4mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体 2mL×1 支,4℃保存。
样本处理:
新鲜土样风干,过 30-50目筛。
测定操作表:
对照管
测定管
土样(g)
40
甲苯(μL)
30
25℃, 静置 15min
试剂一 (μL)
140
120
试剂二(μL)
20
试剂三(μL)
试剂四(μL)
充分混匀,于 30℃震荡反应 3h ,于 10000rpm ,4℃离心 10min ,取 150μL 于微量石英比色皿/96 孔板,测定 465nm 处吸光值,记为 A 对照管和 A 测定管,△A=A 测定管- A 对照管
酶活计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
酶活性定义:
每克土壤每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
ε :愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm ;d:比色皿光径,1cm ;V 反总:反应总体积,0.2mL;W:样本质量,g;T:反应时间,3h
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
每克土壤每天氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm ;d:比色皿光径,0.5cm ;V 反总:反应总体积,0.2mL;W:样本质量,g;T:反应时间,3h