土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(S-α-Afa)活性检测试剂盒/48样
测定意义：
土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(S- α-Afa,EC 3.2.1.55)是一种能够水解非还原呋喃阿拉伯糖残基的糖苷酶类。
本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法，S-α-Afa分解对-硝基苯阿拉伯呋喃糖苷生成对-硝基苯酚(PNP), 后者在405nm 有大吸收峰，通过测定吸光值升高速率即可得 出α-Afa 酶活性大小。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 液体40mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂二 | 粉剂mg×1瓶 | 4℃保存 | 临用前甩几下使粉剂落入底部，再加15.5mL试剂一，充分溶解备用。 |
试剂三 | 液体20mL×1瓶 | 4℃保存 | |
标准品 | 粉剂×1支 | 4℃保存 | 若重新做标曲，则用到该试剂 |
所需的仪器和用品：
酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、蒸馏水。
土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(S-α-Afa)活性测定：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备：
取新鲜土样或者37度烘箱风干(需先粗研磨),过40 目筛网，备用。
2、上机检测：
① 酶标仪预热30 min 以上，调节波长至405 nm。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂(μL ) | 测定管 | 对照管 |
土样(g) | 0.1g | 0.1g |
试剂 — | | 300 |
试剂二 | 300 | |
迅速混匀，37℃保 温1h ( 间隔 5min振荡混匀一次 ) |
试剂三 | 200 | 200 |
混匀,12000rpm,离心5min,立即取上清液200μ于96孔板中 ，立即于405nm下读取吸光值A,△A=A测定-A对照(每个样本需做一个自身对照) 。 |
注:
1、若A 测定超过1.8,可对后一步的待检测上清液(测定管和对照管)同时进行稀释
(用水稀释即可),稀释倍数 D 代入计算公式；
2、若△A 过小，可以增加土样量或延长保温时间(如：2h 或更长),重新调整的样本量 W和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。
3、若同时检测同一背景下的土壤样本，此批土壤样本可做一个样本自身对照，节省时间；若是不同背景下的土壤样本(如黑土，红土，黄土等),则每个样本需做一个自身对照，即按照说明书加样表操作即可，
结果计算：
1、标准曲线：
y=0.1292x-0.0128;x是标准品PNP质量(μg),y是△A。
2、活性定义：
在37℃,每小时每克土壤产生1 μg 对-硝基苯酚(PNP) 定义为1 个酶活单位。
S- α-Afa(μg/h/g 土样)=[(△A+0.0128)÷0.1292]÷W÷T×D=7.74×(△A+0.0128)÷W×DW--- 土壤样品质量， g;D--- 稀释倍数，未稀释即为1;T--- 催化反应时间，1h; PNP相对分子质量---139.11。
附：标准曲线制作过程：
1、制备标准品母液(1mg/mL): 向标准品EP管里面加入1ml 蒸馏水溶解，若有结晶
析出，需37℃水浴至完全溶解。
2、把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0,0.2,0.4,0.6,0.8,1 mg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3、在 EP 管中直接加入：10μL标准品+290μL 试剂—+200μL 试剂三，混匀，立即取上清液200μL于9 6孔 板 中 ，立即于405nm下读取吸光值A。
4、根据结果制作标准曲线。
