土壤过氧化物酶(S-POD)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义:
S-POD 主要来源于土壤微生物,能够氧化土壤有机物质产生过氧化物,在腐殖质的形成过程中具有重要作用。
测定原理:
S-POD 催化有机物质氧化成醌,后者在 430nm 有特征光吸收。
自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、乙醚 50mL(不允许快递)和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:粉剂×2 瓶,4℃保存;临用前取一瓶,加入 6mL 蒸馏水充分溶解后待用;用不完的试剂 4℃保存一周。
试剂二:液体 2.5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:液体 6mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:乙醚 50mL×1 瓶,4℃保存;(自备)。
样本处理:
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50目筛。
测定操作表:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 430nm,蒸馏水调零。
2、加样表
试剂名称 | 测定管 |
风干土样(g) | 0.02 |
试剂一 (μL) | 100 |
试剂二(μL) | 20 |
振荡混匀,30℃恒温培养 1 h |
试剂三(μL) | 50 |
试剂四(μL) | 430 |
振荡数次,25℃室温静置30min ,吸取 200μL 上层液于 430nm 处测定吸光值 A |
(注 意:1、因乙醚粘度小,易掉液,吸取前需先将枪头在上层液里润洗 2~3 次,再转移测定;
2、乙醚易挥发,转移到 96 孔板后立即测定,最好一个一个测定)。
S-POD 活力计算:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 8.97x -0.003 ;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值 A。
单位的定义:
每天每 g 土样中产生 1mg 紫色没食子素定义为一个酶活力单位。
S-POD 活力(mg/d/g 土样)=(A+0.003) ÷8.97×V 反总÷W÷T=80×(A+0.003)
T:反应时间,1h=1/24d; V 反总:反应体系总体积 0.6mL;W:样本质量,0.02g。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 4.485x -0.003 ;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值 A。
单位的定义:
每天每g土样中产生1mg 紫色没食子素定义为一个酶活力单位。
S-POD 活力(mg/d/g 土样)=(A+0.003) ÷4.485×V 反总÷W÷T=160×(A+0.003)
T:反应时间,1h=1/24d; V 反总:反应体系总体积 0.6mL;W:样本质量,0.02g。