FDA水解酶检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义:
FDA水解 应能很好的 应土壤中微生物活性和土壤质 的变化以及生态系统中有机质的转化,是土壤质 研究中的重要生物学指标之一。
测定原理:
FDA是一种无色化合物,在介质中能被许多土壤酶所催化水解,并脱水应,产生酶解终产物荧光素,稳定不易被分解,并在490nm 处有强吸收峰,通过检测490nm 处的吸光值变化可算得FDA水解酶活性。
自备实验用品及仪器:
天平、常温离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制:
标准液:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体50mL×1 支,4℃保存。
试剂二: 粉剂 1 瓶,-20℃避光保存,临用前加5mL 试剂 溶解。
试剂三: 液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
样本处理:
取风过 30-50目筛土壤约0.1g,备用。
测定操作表:
空白管
标准管
对照管
测定管
样本 g
0.1
标准液 µL
100
蒸水 µL
试剂一 µL
500
600
试剂 µL
充分混匀,30℃,震荡 1h
试剂µL
400
10000g ,25℃,离心 5min,取 清测定 490nm 处吸光值 A ,△A1=A 标准管-A 空白管,△A2=A 测定管-A 对照管
注 意: 空白管和标准管只需测定一次
酶活性算公式:
酶活性定义:
每克土壤每天产生1μmol 荧光素的量为一个酶活力单位。
S-FDA活性(μmol/d/g土样)=(△A2÷△A1×C标准品)×V反总÷W= 2.4×(△A2÷△A1)÷W
C 标准品:标准品浓度 100μmol/L;V 反总:反应总体积,1mL;W:样本质量,g。
注意事项:
1、尽量采用新鲜土样或者短期温保存样品,否则很难准确映酶的活性。
2、测定之前进行预实验,若吸光值较高,请进行适当的稀释再测定,并在 算公式中乘以稀释倍数。