土壤磷酸二酯酶(S-PDE)活性检测试剂盒/48样
测定意义：
土壤磷酸二酯酶（S-PDE，EC 3.1.4.1）是在土壤磷酸单酯酶之后的的第二大磷酸酶。其在土壤有机磷的循环代谢中起到重要作用。
本试剂盒提供一种简单、灵敏、快速的的检测方法。土壤磷酸二酯酶（S-PDE）催化双(4-硝基苯)磷酸酯 （ BNPP）生成黄色的产物 PNP，该产物在 405nm 处有大吸收峰。通过检测 PNP 在 405nm 下的增加速率，即可得到 S-PDE 酶活性大小。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 液体100mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂二 | 粉体mg×6支 | 4℃保存 | 临用前每支甩几下或离心使粉剂落入底部，2mL蒸馏水充分溶解，现配先用，两天内用完。 |
试剂三 | 液体40mL×1瓶 | 4℃保存 | |
标准品 | 粉剂mg×1支 | 4℃保存 | 若重新做标曲，则用到该试剂。 |
所需的仪器和用品：
酶标仪，96孔板，台式离心机，水浴锅或恒温培养箱，天平，可调式移液器 。
土壤磷酸二酯酶(S - PDE)活性测定 :
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备：
取新鲜土样或干土（风干或者 37 度烘箱风干），先粗研磨，过40目筛网备用。
2、上机检测：
① 酶标仪预热30min，调节波长到405nm。
② 在离心管中依次加入下列试剂：
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
土壤 | 0.1g鲜土或0.05g干土 | 0.1g鲜土或0.05g干土 |
试剂一 | 500 | 500 |
蒸馏水 | 100 | |
37℃（水浴锅或恒温培养箱）振荡反应1 h |
试剂三 | 400 | 400 |
混匀，12000rpm室温离心5min，立即取上清液200μL于96孔板中，立即于 405nm下读取吸光值A，△A= A 测定- A 对照（参考注意事项）。 |
注:
1、若 A 测定超过1.5，可对后一步的待检测上清液(测定管和对照管)同时进行稀释（用水稀释即可），稀释倍数D 代入计算公式；
2、若ΔA 在零附近徘徊，可延长 37℃的孵育时间 T（如增至 4 小时或更长） ，或增加土样质量 W（如增至 0.2g）。则改变后的 T 和 W 需代入计算公式重新计算。
3、若同时检测同一背景下的土壤样本，此批土壤样本可做做三次样本自身对照管（取平均值作为这批土壤样本的对照管），节省时间；若是不同背景下的土壤样本（如黑土，红土，黄土等），则每个样本需做一个自身对照，即按照说明书加样表操作即可，
结果计算：
1、标准曲线：
y = 0.0127x - 0.01 ；x 是PNP摩尔质量（nmol）,y是△A。
2、活性定义：
在 37℃,每克土壤每小时水解 BNPP 产生1nmol PNP 定义为1个酶活单位。
S-PDE(nmol/h/g 土样)=[(△A+0.01) ÷0.0127] ÷W÷T × D=78.74 × (△A+0.01) ÷W × D W---土壤样品质量，g；D---稀释倍数，未稀释即为1；T---催化反应时间，1 h；PNP 相对分子质量---139.11。
附：标准曲线制作过程：
1、制备标准品母液（5μmoL/mL）：标准品用10mL蒸馏水溶解。（母液需在两天内用）。
2、把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0 ，0.2 ，0.4 ，0.6 ，0.8，1. μmol/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3、依据显色反应阶段测定管的加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。
