土壤β-半乳糖苷酶(S-β-GAL)活性检测试剂盒/48样
测定意义：
土壤β-半乳糖苷酶 (β-GAL ，EC 3.2.1.23)又称β-D-半乳糖苷半乳糖基转移酶，参与土壤中碳水化合物的水解。
本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法， β-GAL 分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚（PNP），后者在 405nm 有大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL 活性。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 粉剂mg×1瓶 | -20℃保存 | 临用前加入8mL蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存。 |
试剂二 | 液体30mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂三 | 液体40mL×1瓶 | 4℃保存 | |
标准品 | 粉剂×1支 | 4℃保存 | 若重新做标曲，则用到该试剂。 |
所需的仪器和用品：
酶标仪、 96孔板、台式离心机、恒温振荡培养箱/水浴锅、可调式移液器、天平。
土壤β-半乳糖苷酶(S-β-GAL)酶活检测：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备：
取新鲜土样或干土（风干或者 37度烘箱风干），先粗研磨，过40目筛网备用。
注：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻；
2、上机检测：
① 酶标仪预热30min，调节波长到405nm。
② 在 EP管中依次加入：
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 | 空白管(仅做一次) |
土样(g) | 0.1 | 0.1 | |
试剂一 | 150 | | 150 |
蒸馏水 | | 150 | |
试剂二 | 300 | 300 | 300 |
混匀，37℃振荡反应1h。 |
试剂三 | 350 | 350 | 350 |
混匀 ，12000rpm室温离心10min，取上清液200μL于96孔板中于405nm下读取吸光值A，△A=A 测定- A 对照-A空白（每个样本做一个自身对照）。 |
注:
1、若ΔA 在零附近徘徊，可延长 37℃的孵育时间 T（如增至 4 小时或更长），或增加土样质量 W（如增至 0.2g）。则改变后的 T 和 W 需代入计算公式重新计算。
2、若测定管 A 值大于1.5 或△A 大于1.5，可缩短37℃的孵育时间 T（如减至 0.5 小时或更短）。则改变后 T 需代入计算公式重新计算。或对后一步的待检测上清液（包括测定管、对照管和空白管）同时用蒸馏水进行稀释，稀释倍数 D 代入计算公式。
结果计算：
1、标准曲线方程：
y = 0.0965x + 0.005 ；x 为标准品质量(μg），y 为△A。
2、单位定义：
每小时每克土样中产生1nmol 对-硝基苯酚（PNP）定义为一个酶活单位。
S-β-GAL 活力(nmol/h/g 土样)=(ΔA-0.005)÷0.0965 ÷Mr × 103 ÷W÷T × D=74.5 × (ΔA-0.005)÷W × DT---反应时间， 1h； W---实际称取土样质量，g；Mr--- PNP 相对分子质量，139.11；D---稀释倍数，未稀释即为1。
附：标准曲线制作过程：
1、制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品EP管里面加入1mL蒸馏水。
2、把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 mg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3、在 EP 管中依次加入：20 μL 标准品+130μL蒸馏水+300μL试剂二+350μL试剂三，混匀，取 200 μL 至 96 孔板中，于405nm下读取吸光值。
4、根据结果制作标准曲线。
