土壤精氨酸脱氨酶活性检测试剂盒/24样
测定意义：
氮素是限制植物生长发育的主要营养元素之一，土壤氮素是植物氮素营养的主要来源。其中土壤精氨酸脱氨酶也与土壤中氮转化有着密切关系。
本试剂盒利用精氨酸脱氨酶水解精氨酸生成NH3-N, 该产物在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚反应，生成水溶性染料靛酚蓝，通过检测生成的有色物质在630nm 的大光吸收峰，进而得出土壤精氨酸脱氨酶活力大小。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 粉剂mg×1瓶 | 4℃保存 | 临用前加入18mL蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍4℃保存。 |
试剂二 | 液体30mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂三 | 液体13mL×1瓶 | 4℃保存 | 避光保存。 |
试剂四 | 液体7mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂五 | A:液体7mL×2瓶
B:液体μL×1支 | 4℃保存 | 临用前取60μL的B液进一瓶A液中，混匀后作为试剂五使用。混匀后的试剂五一周内用完。 |
标准品 | 粉体mg×1支 | 4℃保存 | 若重新做标曲，则用到该试剂。 |
所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿(光径1cm)、 离心机、水浴锅或恒温培养箱、可调式移液器、蒸馏水。
土壤精氨酸脱氨酶活性测定：
建议正式实验前选取2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备：
取新鲜土样或干土(风干或者37 度烘箱风干),先粗研磨，过40目筛网备用。
2、测定步骤：
① 培养：取EP管依次加入：
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
土样(g) | 0. 5 | 0. 5 |
试剂一 | 600 | |
蒸馏水 | | 600 |
混匀，放入37℃水浴锅或恒温培养箱中孵育3小时。 |
试剂二 | 600 | 600 |
震荡提取30min,8000rpm,25℃离心5min,取上清液。 |
② 可见分光光度计预热30min 以上，调节波长至630nm。
③ 显色反应：在 EP 管中依次加入：
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
上清液 | 60 | 60 |
蒸馏水 | 180 | 180 |
试剂三 | 240 | 240 |
试剂四 | 240 | 240 |
试剂五 | 240 | 240 |
混匀，37℃放置20min后，于630nm读取吸光值A,全部液体转移至1mL玻璃比色皿(光径1cm)中△A=A测定管-A对照管(每个样本做一个自 身对照)。 |
结果计算：
1、标准曲线方程：
y =1.9393x-0.004;x 为标准品质量(μg),y为吸光值△A。
2、土壤酶活定义：
每天每克土样中产生1μg 的NH3-N定义为一个酶活力单位。
土壤精氨酸脱氨酶活力(μg/d/g土样)=(△A+0.004)÷1.9393×(V÷V1)÷W÷T =82.5×(△A+0.004)÷WV---反应总体积，1200μL;V1--- 显色反应中上清液体积，60μL;T--- 反应时间，3h=1/8d;W--- 土壤样本实际取样质量，g.
附：标准曲线制作过程：
1、把标准品母液(1mg/mL), 用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0,2,4,6,8,10. μg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
2、在显色反应阶段，按照测定管加样表操作，依据结果即可制作标准曲线
