土壤中性磷酸酶(S-NP)检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义：
土壤磷酸酶是催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。磷酸酶活性受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 的显著影响，根据最适 PH 范围，一般把土壤磷酸酶分为中性、酸性和碱性三种类型。
测定原理：
中性环境中，S-NP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出 NP 活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。
试剂组成和配制：
试剂二：粉剂×1瓶， 4℃保存。用前加 100mL 蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体×1瓶， 4℃保存。
试剂四：粉剂×1瓶， 4℃避光保存。临用前加 576μL 无水乙醇（自备），24μL 蒸馏水充分溶解。（变褐色后不能再使用）
标准品：液体×1 瓶，0.5 μmol/mL 酚标准液，4℃保存。
催化反应：
称取风干混匀土壤约 0.1g ，加入 50μL 甲苯（自备），轻摇 15min；加 400μL 试剂一并且摇匀后，置于 37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应 24h；到时后迅速加入 1mL 试剂二充分混匀， 以终止酶催化的反应。 8000g ，25℃离心 10min，取上清液置于冰上待测。
显色反应：
1、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。
2、空白管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入 10μL 蒸馏水，20μL 试剂三，4μL 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 166μL ，混匀后 25℃静置30min ，于 660nm 测定吸光度，记为 A 空白管。
3、标准管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入 10μL 标准液，20μL 试剂三，4μL 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 166μL ，混匀后 25℃静置 30 min ，于 660nm 测定吸光度，记为 A 标准管。
4、测定管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入 10μL 上清液，20μL 试剂三，4μL 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 166μL ，混匀后室温 25℃30min ，于 660nm 测定吸光度，记为 A 测定管。
注 意：空白管和标准管只需测定一次。
S-NP 活性计算：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
活性单位定义：
37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为 1个酶活单位。
S-NP (μmol/d/g 土样）=[C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总÷W÷T = 0.725×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W，C 标准液：0.5μmol/mL；V 总：催化体系总体积，1.45mL；W：土壤样品质量，g；T：催化反应时间，24 h=1 d。
