土壤过氧化氢酶(S-CAT)检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义:
S-CAT 是土壤微生物代谢的重要酶类,在 H₂O₂清除系统中具有重要作用。
测定原理:
H₂O₂在 240nm 下有特征吸收峰,通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化,即可反应 S-CAT活性的高低。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一: 液体 100μL×5 瓶,4℃保存;临用前每瓶加入 9.9mL 蒸馏水充分溶解后待用;用不完的试剂 4℃保存;
试剂二: 粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入 2mL 蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂 4℃保存(如出现结晶析出,60℃-90℃水浴溶解后使用);
试剂三: 液体 6mL×1 瓶,4℃保存。
样品处理:
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50目筛。
测定操作表:
试剂名称 | 测定管 | 无基质管 | 无土管 |
风干土样(g) | 0.1 | 0.1 | |
试剂一 (μL) | 1000 | | 1000 |
蒸馏水(μL) | | 1000 | |
25℃振荡培养 20min |
试剂二(μL) | 25 | 25 | 25 |
混匀 8000g ,25℃离心 5min ,取 820μL 上清 |
试剂三(μL) | 96 | 96 | 96 |
混匀,用蒸馏水调零,240nm 处记录各管 A 值。 |
注 意:每个测定管要设一个无基质管,无土管只要做一管
S-CAT 活性计算:
单位的定义:
每天每 g 风干土样催化 1μmol H₂O₂降解定义为一个酶活力单位。
计算公式:
S-CAT (μmol/d/g)=[(A 无土管-A 测定管+A 无基质管)×V 反总÷ (ε×d)×10⁶]÷W÷T=18.9×(A无土管-A 测定管+A 无基质管)
V 反总:反应体系总体积,1.145×10-3 L;ε:过氧化氢摩尔消光系数,4.36×10⁴ L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm; T:反应时间,20 min=1/72d; W:样本质量,0.1g。