土壤过氧化氢酶(S-CAT)检测试剂盒 ; 100管/48样
测定意义:
H₂O₂在 240nm下有特征吸收峰,通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化,即可反应 S-CAT活性的高低。
测定原理:
用弱碱性提取碱溶性磷和吸附态磷,用钼锑抗比色法测定。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 300μL×1 瓶,4℃保存;临用前加入 29.7mL 蒸馏水充分溶解后待用;用不完的试剂 4℃保存;
试剂二: 粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入 1mL 蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂 4℃保存(如出现结晶析出,60℃-90℃水浴溶解后使用);
试剂三:液体 3mL×1 瓶,4℃保存。
样品处理:
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50目筛。
测定操作表:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 240nm,蒸馏水调零。
2、测定前务必准备 96 孔 UV 板一块(UV 板不是普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,检测波长小于 340nm 务必使用UV 板)。
3、加样表
试剂名称 | 测定管 | 无基质管 | 无土管 |
风干土样(g) | 0.03 | 0.03 | |
试剂一 (μL) | 260 | | 260 |
蒸馏水(μL) | | 260 | |
25℃振荡培养 20min |
试剂二(μL) | 10 | 10 | 10 |
混匀 8000g ,25℃离心 5min ,取 180uL 上清 |
试剂三(μL) | 20 | 20 | 20 |
混匀, 240nm 处记录各管吸光值 A |
注 意:每个测定管要设一个无基质管,无土管只要做一管。
S-CAT 活性计算:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
单位的定义:
每天每 g 风干土样催化 1μmol H₂O₂降解定义为一个酶活力单位。
计算公式:
S-CAT(μmol/d/g)=[(A 无土管-A 测定管+A 无基质管)×V 反总÷(ε×d)×10⁶]÷W÷T=16.5×(A无土管-A 测定管+A 无基质管)V 反总:反应体系总体积,3×10-4 L;ε:过氧化氢摩尔消光系数,4.36×10⁴L / mol /cm;d:比色皿光径, 1cm; T:反应时间,20 min=1/72d; W:样本质量,0.03g
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
单位的定义:
每天每 g 风干土样催化 1μmol H₂O₂降解定义为一个酶活力单位。
计算公式:
S-CAT(μmol/d/g)=[(A 无土管-A 测定管+A 无基质管)×V 反总÷(ε×d)×10⁶]÷W÷T=33×(A无土管-A 测定管+A 无基质管)V 反总:反应体系总体积,3×10-4 L;ε:过氧化氢摩尔消光系数,4.36×10⁴ L / mol /cm;d:96 孔板光径, 0.5cm;T:反应时间,20 min=1/72d; W:样品质量,0.03g。