土壤β葡萄糖苷酶(S-β-GC)/纤维二糖酶检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义:
S- β-GC能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
测定原理:
S- β-GC能够催化对-硝基苯- β-D吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在 400nm 有特征光吸收。
自备用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×2 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 6mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂三:液体 25mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
样品处理:
新鲜土样自然风干或37 度烘箱风干,过30~50目筛。
测定操作表:
试剂名称
测定管
对照管
风干土样(g)
0.05
试剂一 (μL)
25
试剂二 (μL)
400
室温振荡混匀 15min 90℃振荡混匀 15min
蒸馏水
试剂三 (μL)
160
混匀, 37℃振荡反应 1h 后,立即 90℃水浴 5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却 10000g 25℃离心 10min ,取上清液上清液 (μL)
上清液 (μL)
500
试剂四 (μL)
1000
充分混匀,室温静置 2min 后,400nm 处蒸馏水调零,测定吸光值 A,计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。
S-β-GC 活力计算:
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0032x -0.0027;x 为标准品浓度 ( μmol/L),y 为吸光值。
单位的定义:
每天每 g 土样中产生 1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-β-GC活力(μmol/d /g土样)=(ΔA+0.0027)÷0.0032×V 反总÷W÷T =138.7×(ΔA+0.0027) T:反应时间,1h=1/24d; V反总:反应体系总体积:9.25×10-⁴ L;W:样本质量,0.05g。