土壤脲酶(S-UE)检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义:
S-UE能够水解尿素,产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。
测定原理:
利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的 NH₃-N。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯(不允许快递)。
试剂组成和配制:
试剂一:甲苯 10mL×1 瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×1瓶, 临用前加入 20mL 蒸馏水,充分溶解待用,4℃保存;用不完的试剂 4℃保存;
试剂三:液体 65mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:A 液:液体 1mL×1 瓶,4℃保存;试剂四 B 液:液体 4mL×1 瓶,4℃保存;临用前将 A 液倒入 B液中混合,待用;用不完的试剂 4℃保存一周;
试剂五:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
样品处理:
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50目筛。
测定操作表:
1、培养
2、将培养结束的上清液稀释 10 倍(取 0.1mL 上清液,加入 0.9mL 蒸馏水)。
3、测氨量
| 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.25 | 0.25 |
试剂一 (μL) | 125 | 125 |
振荡混匀,室温放置 15min |
试剂二(μL) | 625 | |
蒸馏水(μL) | | 625 |
试剂三(μL) | 1250 | 1250 |
混匀,放入 37℃水浴培养 24h 后,10000g 25℃离心 10min,取上清液。 |
| 测定管 | 对照管 |
稀释后的上清液(μL) | 400 | 400 |
试剂四 (μL) | 80 | 80 |
试剂五(μL) | 60 | 60 |
试剂五(μL) | 60 | 60 |
充分混匀,室温放置 20min |
蒸馏水(μL) | 460 | 460 |
混匀, 578nm 处蒸馏水调零,测 A 值,ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管 |
脲酶活力计算:标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0915x +0.0373;x 为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。
单位的定义:
每天每 g 土样中产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
脲酶活力(μg/d /g土样)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷W÷T =874×(ΔA -0.0373)10:稀释倍数;
T:反应时间,1d;V 反总:反应体系总体积:2mL;W:样本质量,0.25g。