蔬菜中硝酸盐检测试剂盒/96样
测定意义：
用pH9.6～9.7 碱性缓冲液提取样品中硝酸根离子，同时加活性炭去除色素类，加沉淀剂去除蛋白质及其他干扰物质，利用硝酸根离子和亚硝酸根离子在紫外区 219nm 处具有等吸收波长的特性，测定提取液的吸光度，其测得结果为硝酸盐和亚硝酸盐吸光度的总体，鉴于新鲜蔬菜、水果中亚硝酸盐含量甚微，可忽略不计。测定结果为硝酸盐的吸光度，依据从标准曲线计算出硝酸盐含量。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
活性炭 | 1g×1支 | 室温 | |
试剂一 | 液体6mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂二 | 液体2mL×1支 | 4℃保存 | |
试剂三 | 液体2mL×1支 | 4℃保存 | |
标准品 | 液体×1支 | 4℃保存 | 若重新做标曲，则用到该试剂。 |
所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔UV 板（用于紫外光波长下的测定）、蒸馏水、常温离心机，可调式往返振荡机。
蔬菜中硝酸盐含量测定:
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备：
① 组织样本：取 0.2g 组织样本（若样本较大可研磨粉碎后取样），加1mL的蒸馏水研磨匀浆，全部转移至 2mLEP 管中，再依次加入 0.06mL 试剂一和10mg的活性炭混匀，放置于可调式往返振荡机上（200 次/min）振荡 30min(如无此仪器需间隔 3min 手动晃动几秒)。再依次加入 0.02mL 的试剂二和 0.02mL 的试剂三，充分混匀，加 0.9mL 蒸馏水定容至 2mL，混匀后室温放置 5min。12000rpm 室温离心 5min，澄清的上清液做为样本待检上清液；空白待检上清液制备过程除了不加样本之外，其他操作步骤同组织样本制备过程。
2、上机检测：
① 酶标仪预热30min 以上。
② 在96孔UV板中依次加入：
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管（仅 做 一 次 ） |
样本待检测上清液 | 200 | |
空白待检测上清液 | | 200 |
混匀 ，于219 n m 分别读吸光值A ，△ A = A测定管- A空白管 。 |
注 : 若A 值超过1.2，可用蒸馏水对待检上清液稀释，稀释倍数D 代入计算公式重新计算；
结果计算：
1、标准曲线方程：
y = 0.0348x + 0.0029；x 为标准品浓度(μg/mL)，y 为吸光值△A。
2、蔬菜中硝酸盐(NO3-含量(μg/g或mg/Kg)=(△A-0.0029) ÷ 0.0348 ×V × D÷W=28.74 × (△A-0.0029) ×V × D÷W
V---终待测总体积，2mL； W---取样质量，g；D---稀释倍数，未稀释即为1。本标准适用于新鲜蔬菜及水果中硝酸盐含量的测定。本方法检出限为1.2mg/kg。
附：标准曲线制作过程：
1、标准品母液（500μg/mL）：
2、用蒸馏水把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 4, 8, 12,16, 20. μg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3、直接取200μL不同浓度的标准品至 96孔 UV 板中，于219nm 分别读吸光值 A，根据结果即可制作标准曲线。
