土壤木质素过氧化物酶(S-LiP)检测试剂盒 ; 100T/48S
测定意义:
木质素过氧化物酶(EC1.11.1.14 )是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,属于木质素降解酶系,在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。
测定原理:
木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛,在310nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
样品处理:
新鲜土样风干,过 30-50目筛。
测定操作:
对照管
测定管
土样(g)
0.04
甲苯(μL)
30
25℃静置 15min
试剂一 (μL)
200
蒸馏水(μL)
试剂二(μL)
120
试剂三(μL)
80
30℃震荡反应 3h,冰浴 5min ,12000g,4℃离心 10min,取上清 200μL,于微量石英比色皿/96 孔板(UV)板,测定 310nm 处吸光值,分别记为 A 对照和 A 测定,△A=A 测定- A 对照
酶活计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
酶活性定义:
每克土壤每天氧化 1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。
ε:藜芦醛摩尔消光系数:9300L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm ;V 反总:反应总体积,0.4mL; W:样本质量,g;T:反应时间,3h。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
ε:藜芦醛摩尔消光系数:9300L/mol/cm ;d:比色皿光径,0.5cm ;V 反总:反应总体积,0.4mL; W:样本质量,g;T:反应时间,3h。