维生素B6检测试剂盒 ; 100T/96S

维生素B6检测试剂盒 ; 100T/96S

测定意义： 

维生素 B6（Vitamin B6）又称吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在体内以磷酸酯的形式存在，是一种水溶性维生：素，在细胞中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢，对生物体具有极其重要的作用。

测定原理： 

VB6 与 4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物，在 390nm 有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：

天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅、蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 70mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 1mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 8mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体 8mL×1 瓶，4℃避光保存。

样品处理：

1、组织：将样品磨碎，按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10的比例（建议称取约 0.1g ，加入 0.6mL提取液）加入提取液，60℃浸提 30min ，加蒸馏水 0.4mL ，

混匀后于 25℃, 16000rpm 离心 10min，取上清测定（动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心 20-30 分钟）。

2、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1  的比例（建议 500 万细胞加入 0.6mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；加蒸馏水 0.4mL，混匀后于 25℃, 16000rpm 离心 10min，取上清测定。

3、血清：直接测定。

测定操作表：

计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.3635x+0.0205 ，R2 = 0.9986

1、按照蛋白含量计算

     VB6 含量(μg/mg prot)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V 反总÷(V样×Cpr)= 13.76×(△A - 0.0205)÷ Cpr

2、按照样本质量计算

     VB6 含量(μg/g)= (△A - 0.0205)÷ 0.3635×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)= 13.76×(△A - 0.0205)÷ W

3、按照细胞数量计算

     VB6 含量(μg/10⁴cell）=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) = 13.76×(△A - 0.0205)÷ 细胞数量

4、按照液体体积计算

     VB6 含量(μg/mL)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V 反总÷V 样= 13.76×(△A - 0.0205）

     V 反总：反应总体积，0.2mL;：V 样：加入样本体积，0.04mL;V 样总：加入提取液体积,1mL; Cpr：蛋白浓度，mg/mL;W:样本质量，g

b．用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.1818x+0.0205 ，R2 = 0.9986

1、按照蛋白含量计算

     VB6 含量(μg/mg prot）=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V 反总÷(V 样×Cpr)= 27.52×(△A - 0.0205)÷ Cpr

2、按照样本质量计算

     VB6 含量(μg/g）=(△A - 0.0205)÷ 0.1818 ×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)= 27.52×  (△A - 0.0205)÷ W

3、按照细胞数量计算

     VB6 含量(μg/10⁴cell）=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总）= 27.52× (△A - 0.0205)÷ 细胞数量

4、按照液体体积计算

     VB6 含量(μg/mL)= (△A - 0.0205)÷ 0.1818×V 反总÷V 样=27.52×(△A - 0.0205)V反总：反应总体积,0.2mL;：V 样：加入样本体

     积， 0.04mL；V 样总：加入提取 液体积,1mL； Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g

注意事项：

1、若测定结果中吸光值超过1，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

2、蛋白浓度较高的样品，比如动物组织，若显色完成后有沉淀产生，将样本稀释后再测定，在计算公式中乘以稀释倍数。

3、显色完成后立即进行测定。