维生素B1检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义:
维生素 B1(Vitamin B1)是构成脱羧辅酶的主要成分,参与细胞代谢中的三羧酸循环,是维持机体正常代谢必须的水溶性维生素,在生物体能量代谢中有重要的作用。
测定原理:
VB1 在碱性条件下还原铁氰化钾生成亚铁氰化钾,亚铁氰化钾与 Fe3+在弱酸条件下生成普鲁士蓝,在 704nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵、离心机、可见分光光度计、恒温水浴锅、1 mL 玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 35mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 1mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体 12mL×1 瓶,4℃保存。
试剂五:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存。
样本处理:
1、组织:将样品磨碎,按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g ,加入 0.6mL提取液)加入提取液,60℃浸提 30min ,加蒸馏水 0.4mL ,混匀后于 25℃, 13000g 离心 10min,取上清测定(动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心 20-30 分钟)。
2、细胞:按照细胞数量(10⁴个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 0.6mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w ,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃, 13000g 离心 10min,取上清测定。
3、血清:直接测定。
测定操作:
空白管
测定管
样品(μL)
100
试剂一 (μL)
试剂二 (μL)
80
试剂三 (μL)
充分混匀,80℃反应 10min。
提取液(μL)
试剂四 (μL)
220
试剂五 (μL)
120
H₂O (μL)
300
充分混匀,静置 20min,于 1mL 玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定 704nm 处吸光值,记为A空白管和 A 测定管,△A=A 测定管-A 空白管。