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维生素B1检测试剂盒 ; 50管/48样

维生素B1检测试剂盒 ; 50管/48样

  • 货号:YJ50188
  • 可售卖地:全国
  • 供货:现货供应
  • 保 质 期:半年
  • 品牌:源桔生物
  • 保存温度:2-8℃
  • 检测方法:分光光度法
  • 分类:维生素系列
  • 规格:50管/48样
  • 用途:仅供科研使用
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源桔生物 YJ50188 50管/48样 ¥575 大量 液体盒装
  • 商品详情

维生素B1检测试剂盒 ; 50管/48样

测定意义: 

维生素 B1(Vitamin B1)是构成脱羧辅酶的主要成分,参与细胞代谢中的三羧酸循环,是维持机体正常代谢必须的水溶性维生素,在生物体能量代谢中有重要的作用。

测定原理: 

VB1 在碱性条件下还原铁氰化钾生成亚铁氰化钾,亚铁氰化钾与 Fe3+在弱酸条件下生成普鲁士蓝,在 704nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器:

天平、研钵、离心机、可见分光光度计、恒温水浴锅、1 mL 玻璃比色皿、蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 35mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 1mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体 12mL×1 瓶,4℃保存。

试剂五:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存。

样本处理:

1、组织:将样品磨碎,按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10  的比例(建议称取约 0.1g ,加入 0.6mL提取液)加入提取液,60℃浸提 30min ,加蒸馏水 0.4mL ,混匀后于 25℃, 13000g 离心 10min,取上清测定(动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心 20-30 分钟)。

2、细胞:按照细胞数量(10⁴个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 0.6mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w ,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃, 13000g 离心 10min,取上清测定。

3、血清:直接测定。

测定操作:

空白管

测定管

样品(μL)

 

100

试剂一 (μL)

100

 

试剂 (μL)

80

80

试剂 (μL)

100

100

充分混匀,80℃反应 10min。

提取液(μL)

80

80

试剂 (μL)

220

220

试剂 (μL)

120

120

HO (μL)

300

300

充分混匀,静置 20min,于 1mL 玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定 704nm 处吸光值,记为A空白管和 A 测定管,△A=A 测定管-A 空白管。

计算公式:
标准曲线:
y = 0.017x+0.0031 ,R² = 0.9991 ;x 为标准品浓度:μg/mL;y 为△A(A 测定管-A 空白管)
1、按照蛋白含量计算
     VB1 含量(μg/mg prot)=  (△A-0.0031)÷ 0.017÷Cpr= 58.8×  (△A-0.0031)÷ Cpr
2、按照样本质量计算
     VB1 含量(μg/g 鲜重)= (△A-0.0031)÷ 0.017÷(W÷V 样总)= 58.8×(△A-0.0031)÷ W
3、按照细胞数量计算
     VB1 含量(μg/10⁴ cell)=(△A-0.0031)÷ 0.017÷(细胞数量÷V 样总)= 58.8× (△A-0.0031)÷ 细胞数量
4、按照液体体积计算
     VB1 含量(μg/mL)= (△A-0.0031)÷ 0.017= 58.8× (A-0.0031)V 样总:加入提取液体积,1mL; Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
注意事项:
1、若测定结果中吸光值超过 1,请将样本稀释后进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
2、蛋白浓度较高的样品,比如动物组织,若显色完成后有沉淀产生,将样本稀释后再测定,在计算公式中乘以稀释倍数。
3、显色完成后立即进行测定。
4、标准曲线线性范围为 0.1-10μg/mL。