维生素B1检测试剂盒 ; 100T/96S

维生素B1检测试剂盒 ; 100T/96S

测定意义： 

维生素 B1（Vitamin B1）是构成脱羧辅酶的主要成分，参与细胞代谢中的三羧酸循环，是维持机体正常代谢必须的水溶性维生素，在生物体能量代谢中有重要的作用。

测定原理： 

VB1 在碱性条件下还原铁氰化钾生成亚铁氰化钾，亚铁氰化钾与 Fe3+在弱酸条件下生成普鲁士蓝，在 704nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：

天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅、蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：液体 70mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 1mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 2mL×1 支，4℃保存。

试剂三：液体 2mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂五：液体 3mL×1 瓶，4℃避光保存。

样本处理：

1、组织：将样品磨碎，按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10  的比例（建议称取约 0.1g ，加入 0.6mL提取液）加入提取液，60℃浸提 30min ，加蒸馏水 0.4mL ，混匀后于 25℃, 16000rpm 离心 10min，取上清测定（动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心 20-30min）。

2、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1  的比例（建议 500 万细胞加入 0.6mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；加蒸馏水 0.4mL，混匀后于 25℃, 16000rpm 离心 10min，取上清测定。

3、血清：直接测定。

测定操作：

计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：

y = 0.017x+0.0031 ，R²= 0.9991 ；x 为标准品浓度：μg/mL；y 为△A（A 测定管-A 空白管）

1、按照蛋白含量计算

     VB1 含量(μg/mg prot)= (△A-0.0031)÷ 0.017÷Cpr= 58.8× (△A-0.0031)÷ Cpr

2、按照样本质量计算

     VB1 含量(μg/g 鲜重)= (△A-0.0031)÷ 0.017÷(W÷V 样总）= 58.8×(△A-0.0031)÷ W

3、按照细胞数量计算

     VB1 含量(μg/10⁴cell）=(△A-0.0031)÷ 0.017÷(细胞数量÷V 样总）= 58.8× (△A-0.0031)÷ 细胞数量

4、按照液体体积计算

     VB1 含量(μg/mL)=(△A-0.0031)÷ 0.017= 58.8×(△A-0.0031)V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W:样本质量，g

b．用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：

y = 0.0085x +0.0031 ，R2 = 0.9991 ；x 为标准品浓度：μg/mL；y 为△A（A 测定管-A 空白管）

1、按照蛋白含量计算

     VB1 含量(μg/mg prot）= (△A -0.0031)÷ 0.0085÷Cpr= 117.65×(△A-0.0031)÷ Cpr

2、按照样本质量计算

     VB1 含量(μg/g 鲜重）=(△A-0.0031))÷ 0.0085÷(W÷V 样总)= 117.65× (△A-0.0031)÷ W

3、按照细胞数量计算

     VB1 含量(μg/10⁴ cell）=(△A-0.0031)÷ 0.0085÷(细胞数量÷V 样总)= 117.65×(△A-0.0031)÷ 细胞数量

4、按照液体体积计算

     VB1 含量(μg/mL)= (△A-0.0031)÷ 0.0085= 117.65×(△A-0.0031)V 样总：加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量，g

注意事项：

1、若测定结果中吸光值超过 2，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

2、蛋白浓度较高的样品，比如动物组织，若显色完成后有沉淀产生，将样本稀释后再重新测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

3、显色完成后立即进行测定。

4、标准曲线线性范围为 0.1-10μg/mL。