维生素E检测试剂盒 ; 100T/48S

维生素E检测试剂盒 ; 100T/48S

测定意义： 

维生素 E（Vitamin E）是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是生物体中最主要的抗氧化剂之一，能阻止不饱和脂肪酸收到过氧化作用的损伤，维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能，具有延缓衰老、预防溶血性贫血作用，在医药、化妆品、保健品、食品行业具有较高的应用价值。

测定原理： 

VE 还原 Fe3+为 Fe2+ ，Fe2+与 1,10-菲罗啉产生有色络合物，在 530nm 有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：

天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、漩涡震荡仪。

试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 2mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体 2mL×1 支，4℃保存。

试剂三：液体 2mL×1 支，4℃保存。

试剂四：液体 6mL×1 瓶，4℃保存。

样品处理：

1、组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10  的比例（建议称取约 0.1g ，加入 1mL 提取液）加入提取液，匀浆后用提取液定至 1mL ，定至在漩涡混匀仪上震荡 5min ，于 25℃, 5000g 离心 10min，取上层测。

2、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）后在漩涡混匀仪上震荡 5min ，于 25℃, 5000g 离心 10min，取上层测定。

3、血清：取 0.1mL ，加 0.9mL 提取液，漩涡仪混匀上震荡 5min ，于 25℃, 5000g 离心 10min，取上层测定。

测定操作表：

计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.22x + 0.0065 R² = 0.9978

1、按照蛋白含量计算

     VE 含量(μg/mg prot）=(△A -0.0065)÷ 0.22×V 反总÷(V 样×Cpr)= 9.09× (△A -0.0065)÷ Cpr

2、按照样本质量计算

     VE 含量(μg/g）= (△A -0.0065)÷ 0.22×V 反总÷(V 样×W÷V 样总）= 9.09×(△A -0.0065)÷ W

3、按照细胞数量计算

     VE 含量(μg/10⁴ cell）=(△A -0.0065)÷ 0.22×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总）= 9.09×(△A -0.0065)÷ 细胞数量

4、按照液体体积计算

     VE 含量(μg/mL）= (△A -0.0065)÷ 0.22×V 反总÷V 样×10= 90.9× (△A -0.0065)V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：加入样本

     体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g

b．用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.11x + 0.0065 R2  = 0.9978

1、按照蛋白含量计算

     VE 含量(μg/mg prot）=(△A -0.0065)÷ 0.11×V 反总÷(V 样×Cpr）= 18.18×(△A -0.0065)÷ Cpr

2、按照样本质量计算

     VE 含量(μg/g）=(△A -0.0065)÷0.11×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）= 18.18×  (△A -0.0065）÷ W

3、按照细胞数量计算

     VE 含量(μg/10⁴ cell）=(△A -0.0065)÷ 0.11×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）= 18.18×(△A -0.0065)÷ 细胞数量

4、按照液体体积计算

     VE 含量(μg/mL）=(△A -0.0065)÷0.11×V 反总÷V 样×10= 181.8×(△A -0.0065)V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：加入样本体

     积， 0.1mL;V 样总：加入提取液体积,1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL;W：样本质量，g

注意事项：

若反应体系产生沉淀，需要将样品进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。