酶标仪、96 孔板、低温台式离心机、恒温培养箱、可调式移液器、研钵、水浴锅、冰。
乙酸含量测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品和实验流程，避免样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 生物组织样本：
称取约 0. 1g 组织(水分充足的果实样本取约 0.5g 组织或更多) ，加入1mL 提取液，进行冰浴匀浆。可于 80℃条件下孵育 20min(可使组织样本中干扰测定的酶蛋白变性失活) 。取出冷却至室温后，再于 12000rpm ，室温离心 10min ，取上清，置冰上待测。
【注】：若是非生物组织样本如食品等，可冰浴匀浆后，直接于 12000rpm，室温离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~ 10 的比例进行提取。
② 液体样品：
a、近似中性的液体可直接取 1mL 至 EP 管中；12000rpm ，离心 10min ，上清液待测。
b、酸性液体(PH<5)样本，则需先用 KOH（2M）调溶液的 PH 值至约 7.5 ，并在室温下孵育 30 分钟。取 1mL 转移到 EP 管中；12000rpm ，离心 10min ，上清液待测。
c、若蛋白浓度比较高的样本如牛乳等，可直接取 1mL 牛乳液体样本至 EP 管中，于 80℃条件下孵育 20min（可使部分蛋白变形沉淀析出）。取出冷却至室温后，再于12000rpm ，室温离心 10min ，取上清，置冰上待测。
③ 细胞/细菌样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W ，超声 3S ，间隔 10S ，重复 30次）；12000rpm ，4℃离心 10min ，取上清液，置冰上待测。
【注】：也可按照细菌或细胞数量(10⁴个):提取液体积(mL)为 500~ 1000:1 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm。
② 试剂解冻至室温（25℃) , 或可放在 25℃条件下水浴 5-15min。
③ 试剂一和二和三和四和五和六可按照 40:20:10:10:10:10 比例配成混合液（一枪加100μL 该混合液）（该混合液用多少配多少，现配现用）。依次在 96 孔板中加入：
试剂名称 (μL） | 测定管 |
样本 | 20 |
提取液 | 70 |
试剂一 | 40 |
试剂二 | 20 |
试剂三 | 10 |
试剂四 | 10 |
试剂五 | 10 |
试剂六 | 10 |
混匀，于室温（25℃) 下孵育 5min 后于 340nm处读取 A1 值。 |
试剂七 | 10 |
混匀,于室温（25℃)下孵育10min 后于 340nm处读取 A2(直到 2min内 A2 值变化小于 0.02)，△A=A1-A2。 |
【注】：1、测定管的 A1 值若超过 2（如样本自身颜色较深），可把样本用蒸馏水稀释后再检测，稀释倍数 D 代入计算公式。
2、若△A 小于 0.01 ，可增加样本量 V1（如增至 40μL ，则提取液相应减少，保持总体积不变），或增加样本取样质量 W ，则改变后的 V1 和 W 需代入公式重新计算。3、若△A 差值大于 0.4 或若 A2 值小于 0.4 ，须减少样本量 V1（如减至 10μL ，则提取液相应增加，保持总体积不变），或对样本用蒸馏水稀释后再检测，则改变后的 V1 和稀释倍数 D 需代入公式重新计算。
结果计算：
1、按样本重量计算：
乙酸含量(μg/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×10⁶×Mr]÷(W×V1÷V)×D = 193. 1×ΔA÷W×D乙酸含量(μmol/g 鲜重)
[ΔA÷(ε×d)×V2×10⁶]÷(W×V1÷V)×D =3.22×ΔA÷W×D
2、按照液体体积计算：
乙酸含量(μg/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V2×10⁶×Mr]÷V1×D= 193. 1×ΔA×D
3、按细菌/细胞密度计算：
乙酸含量(μg/10⁴ cell)=[ΔA÷(ε×d)×V2×10⁶×Mr]÷(500×V1÷V)×D = 112.6×ΔA÷500×Dε---NADH 摩尔消光系数，
6.22×10³ L/mol/cm; d---96 孔板光径，0.5cm；V---加入提取液体积，1 mL； V1--加入样本体积，0.02mL；V2---反应总体
积；0.2mL=2×10- ⁴ L；Mr---乙酸分子量;60.05;500---细胞数量，万;W---样本质量，g。
