过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
过氧化氢酶（Catalase）分解H2O2的反应可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其变化量，可计算出 CAT 的活力。
测定原理：
试剂一：液体100ml×1瓶，4℃保存6个月。
试剂二：底物液体10ml ×1瓶，4℃保存 6个月。
试剂三：显色粉剂×1瓶，4℃保存 6个月。加双蒸水至100ml溶解，4℃保存1 个月。（如果底部有不溶粉末沉淀，直接取上清使用，不影响测定结果）
试剂四：液体10ml×1瓶，4℃保存6个月。天冷时会凝固，临用前 37℃水浴至透明方可使用。
操作步骤：
(一)、血清（浆）的检测：
1、操作表（如）：
| 对照管 | 测定管 |
血清（浆）(ml） | | 0.1 |
试剂二(37℃预温）(ml） | 1.0 | 1.0 |
混匀，37℃准确反应1分钟（60秒） |
试剂三(ml） | 1.0 | 1.0 |
试剂四(ml） | 0.1 | 0.1 |
血清(浆）(ml） | 0.1 | |
混匀，波长 405nm，光径 0.5cm，双蒸水调零，测定各管吸光度值。 |
注：一般样本没有溶血、脂血等显著差异情况，对照管的样本变更为双蒸水，做1～2 管对照即可；如需做样本自身对照，则试剂盒所测定样本数量减至48样。
[注]：为方便操作，您可将测试前的准备工作做好，编好试管，加入样本0.1ml及试剂一 1ml，然后将所有的管子均放入 37℃水浴箱中预温 3-5分钟。测试时，管中加入试剂二 0.1ml，同时准确记时，并立即混匀，放入 37℃水浴中，当反应到1分钟时立即加入显色剂终止反应，混匀。依次再测第二﹑第三… 对照管和测定管。每次均要将对照管及测定管同时测定。
(二)、全血的检测：
1、1﹕99溶血液的制备：取50µl全血加双蒸水至5ml充分混匀后放置10分钟，待测。
2、操作表：
| 空白对照管 | 测定管 | 自身对照管 |
双蒸水(ml） | 0.05 | | 2.1 |
1﹕99溶血液(ml） | | 0.05 | 0.05 |
试剂一(37℃预温）(ml） | 1.0 | 1.0 | |
试剂二(37℃预温）(ml） | 0.1 | 0.1 | |
混匀，37℃准确反应1分钟（60秒） |
试剂三(ml） | 1.0 | 1.0 | |
混匀，波长 405nm，光径 0.5cm，双蒸水调零，测定各管吸光度值。 |
(三)、组织样本的检测：
1、组织匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量（g）:体积（ml）=1:9 的比例加入 9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下，制备成 10%的组织匀浆，2500 转/分离心10 分钟，取上清，再用生理盐水稀释成最佳取样浓度，待测（最佳取样浓度摸索见附录）。
3、操作表
| 对照管 | 测定管 |
组织匀浆(ml） | | 0.05 |
试剂一(37℃预温）(ml） | 1.0 | 1.0 |
试剂一(37℃预温）(ml） | 0.1 | 0.1 |
混匀，37℃准确反应1分钟（60秒） |
试剂三(ml） | 1.0 | 1.0 |
试剂四(ml） | 0.1 | 0.1 |
组织匀浆(ml） | 0.05 | |
混匀，波长 405nm，光径 0.5cm，双蒸水调零，测定各管吸光度值。 |
注：一般样本没有高脂等导致显著差异情况，对照管的样本更换成双蒸水，做1～2管对照即可。如需做样本自身对照，则试剂盒所测定样本数量减至48样。
注：
1、测定血清和血浆时，如果样本不溶血，每批样本只需要随机挑 2个样本做对照或者用双蒸水代替样本做对照；如果样本溶血的话，必须每个样本都要做对照。
2、测定组织匀浆时，如果样本不是高脂，每批样本只需要随机挑 2个样本做对照或者用双蒸水代替样本做对照；如果样本高脂，必须每个样本都要做对照。
3、测定全血时，必须每个样本都要做对照。
4、本试剂盒亦可用酶标仪读数（即在反应完后取 200ul进孔板405nm读数，计算公式斜率倒数变为235.65代入计算）。
附录Ⅰ:最佳取样浓度摸索
一、样本来源：正常小鼠肝组织
二、前处理：
10%匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量（g）:体积（ml）=1:9的比例，加入9 倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，制成 10%的组织匀浆，2500转/分，离心 10 分钟，取上清液待测；10%的匀浆液再用生理盐水稀释成不同的浓度： 5% 、2% 、1%、0.5% 、0.25% 、0.125%
操作表：
| 对照管 | 测定管 |
组织匀浆(ml） | | 0.05 |
试剂一(37℃预温）(ml） | 1.0 | 1.0 |
试剂二(37℃预温）(ml） | 1.0 | 1.0 |
混匀，37℃准确反应1分钟(60秒） |
试剂三(ml） | 1.0 | 1.0 |
试剂四(ml） | 0.1 | 0.1 |
组织匀浆(ml） | 0.05 | |
混匀，波长405nm，光径0.5cm，双蒸水调零，测定各管吸光度值。 |
注：一般样本没有高脂等导致显著差异情况，对照管的样本更换成双蒸水，做1～2管对照即可。如需做样本自身对照，则试剂盒所测定样本数量减至48样。
检测结果：
对照 OD值 | 0.671 | | | | | |
匀浆液浓度 | 0.125% | 0.25% | 0.5% | 1% | 2% | 5% |
测定 OD | 0.613 | 0.558 | 0.445 | 0.258 | 0.059 | 0.02 |
绝对 OD | 0.058 | 0.113 | 0.226 | 0.413 | 0.612 | 0.651 |
小鼠组织最佳取样浓度的摸索曲线：
参考取样浓度：小鼠肝脏匀浆为 0.25%～1%。在其范围内酶曲线通过回归曲线的处理，相对成正比关系。若取样浓度过大或过少，则在实验结束后，在进行统计学处理时会出现无显著差异。
