铜蓝蛋白(Cp)含量检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义:
铜蓝蛋白是血浆的含铜蛋白,有运输铜的功能,同时具有氧化酶的活性,是细胞外液重要的抗氧化剂。
测定原理:
铜蓝蛋白催化 3,3,,5,5,-四甲基联苯胺生成蓝色产物,在645nm 处有特征吸收峰,依此可得铜蓝蛋白活性。
自备实验用品及仪器:
天平、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体10mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体20mL×1瓶,4℃避光保存。(使用前37℃预热)
测定操作表:
1、血清(浆)等液体样本:直接检测。
2、动植物组织样本:称取约 0.1g 组织,加入1mL蒸馏水,进行冰浴匀浆。10000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
| 空白管 | 测定管 |
样品(µL) | 100 | 100 |
试剂一(µL) | 300 | 300 |
试剂二(µL) | 200 | |
混匀,37℃预热 5min |
试剂三(µL) | 400 | 400 |
混匀,37℃反应 30min |
试剂二(µL) | | 200 |
混匀,25℃放置 5min ,1 mL 玻璃比色皿,空白管调零,测定 OD645 |
计算公式:
1、按体积计算
单位定义:
37℃条件下,每分钟每毫升样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。
Cp活力(U/mL
V 反总÷V 样÷T=33.33×OD645
2、 按鲜重计算
单位定义:
37℃条件下,每分钟每克样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。
Cp 活力(U/g
鲜重V 反总÷(W×V样÷V样总)÷T=33.33×OD645 ÷W
3、 按蛋白浓度计算
单位定义:
37℃条件下,每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。
Cp 活力(U/mg protV
反总÷(Cpr×V 样)÷T=33.33×OD645 ÷CprV 样:0.1 mL;V 反总:1mL;T:反应时间,30
min;V样总:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度, mg/mL;W:样本质量,g
注意事项:
试剂二和试剂三有一定的毒性和刺激性,请操作时做好防护措施。