总抗氧化能力(DPPH法)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理：
DPPH为稳定的自由基 ，溶于甲醇、乙醇等极性溶剂中，在515nm处有最大吸收。向DPPH溶液中加入抗氧化剂时，会发生脱色反应，因此可用吸光度的变化并以Trolox作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。
自备实验用品：
恒温水浴锅、低温离心机、分光光度计、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体60mL×1瓶，使用前预冷。
试剂一：液体60mL×1瓶，避光保存。
样品的制备：
(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品
血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用EDTA抗凝）4℃, 5000rpm离心10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30d）后再测定。
(2) 组织样品
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
(3) 细胞样品
按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000 ：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
操作步骤：
1、分光光度计预热30min，调节波长至515nm。
2、操作表（在EP管中反应）
| 测定管 | 对照管 |
试剂名称(µL) | | 50 |
样品(µL) | 50 | |
试剂一(µL) | 950 | 950 |
充分混匀，室温避光反应20mi定注意：空白管n，于1mL玻璃比色皿测定515nm吸光值，△A= A空白-A测只需测定一次，若A测定小于0.2，需用提取液稀释后检测。 |
总抗氧化能力计算公式：
1、以自由基清除率表示：
DPPH自由基清除率（％）=(A空白-A测定)÷A空白×100%
2、以标准曲线上获得的抗氧化剂Trolox的量表示：
标准曲线：y=1.4144x - 0.0081R² = 0.9977 x:Trolox浓度( μmol/mL)y:吸光值差值 A
单位定义:用从标准曲线上获得的抗氧化剂Trolox 的量来表示样本的△DPPH自由基清除能力。
(1）按样本质量计算
总抗氧化能力(μmol Trolox/g 鲜重）=(A+0.0081)÷1.4144×V 样÷(V 样÷V 样总×W) (A+0.0081)÷W
(2）按样本蛋白浓度计算 =0.707× △ △
总抗氧化能力(μmol Trolox/mg prot）=(A+0.0081）÷1.4144×V 样÷(V 样÷V 样总×Cpr)=0.707×（A+0.0081）÷Cpr
(3) 按细胞计算 △ △
总抗氧化能力(μmolTrolox/104cell)=(A+0.0081)÷1.4144×V 样÷(V 样÷V 样总×细胞数量（万个）△
(4）按液体体积计算
= 0.707×(△A+0.0081）÷ 细胞数量（万个）总抗氧化能力(μmol Trolox/mL）=(△△A+0.0081）÷1.4144 =0.707×（A+0.0081)
V 样总：加入提取液体积，1 mL；V 样：反应中样品体积，50μL；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。
注意事项：
1、尽量避免使用在酸性条件下呈红色或接近红色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。
2、样品中不宜添加Tween、Triton 和NP-40等去垢剂和DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。
3、若液体样本为碱性，需要用提取液稀释至酸性后再检测。
