总抗氧化能力(DPPH法)检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义：
测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理：
DPPH为稳定的自由基 ，溶于甲醇，乙醇等极性溶剂中，在515nm处有最大吸收。向DPPH 溶液中加入抗氧化剂时，会发生脱色反应，因此可用吸光度的变化并以Trolox作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。
自备实验用品：
恒温水浴锅、低温离心机、酶标仪、96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体120mL×1瓶，使用前预冷。
试剂一：液体45mL×1瓶，避光保存。
样品的制备：
(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品
血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用EDTA抗凝）4℃, 5000rpm离心10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30d）后再测定。
(2) 组织样品
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
(3) 细胞样品
按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000 ：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
操作步骤：
1、酶标仪预热30min，调节波长至515nm。
2、操作表（在EP管中反应）
| 空白管 | 测定管 |
提取液(µL) | 20 | |
样品(µL) | | 20 |
试剂一(µL) | 380 | 380 |
充分混匀，室温避光反应20min，取200μL至96孔板测定515nm吸光值，△A= A空白-A测定注意：空白管只需测定一次，若A测定小于0.2，需用提取液稀释后检测。 |
总抗氧化能力计算公式：
1、以自由基清除率表示：
DPPH自由基清除率(％)A空白-A测定）÷A空白×100%
2、以标准曲线上获得的抗氧化剂Trolox的量表示：
标准曲线：y = 0.7072x - 0.0081R²= 0.9977x:Trolox浓度(μmol/mL)y:吸光值差值△A
单位定义:用从标准曲线上获得的抗氧化剂Trolox的量来表示样本的DPPH自由基清除能力。
(1）按样本质量计算
总抗氧化能力(μmol Trolox/g鲜重)= (△A+0.0081)÷0.7072×V 样÷(V 样÷V 样总×W) =1.414×(△ A+0.0081）÷W
(2）按样本蛋白浓度计算
总抗氧化能力(μmol Trolox/mg prot）=(△A+0.0081)÷0.7072×V 样÷(V 样÷V 样总×Cpr) =1.414×(△A+0.0081)÷Cpr
(3) 按细胞计算
总抗氧化能力(μmol Trolox/10⁴cell)=(△A+0.0081)÷0.7072×V 样÷（V 样÷V 样总×细胞数量（万个）= 1.414×(△A+0.0081）
÷细胞数量（万个）
(4）按液体体积计算
总抗氧化能力(μmol Trolox/mL)=(△A+0.0081)÷0.7072 =1.414×(△A+0.0081）V 样总：加入提取液体积，1mL；V样：反应中
样品体积，20μL；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。
注意事项：
1、尽量避免使用在酸性条件下呈红色或接近红色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。
2、样品中不宜添加 Tween、Triton和NP-40等去垢剂和DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。
3、若液体样本为碱性，需要用提取液稀释至酸性后再检测。
