总抗氧化能力(ABTS法)检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义：
测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理：
ABTS法是使用最广泛的间接检测方法，可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定。ABTS经氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子自由基 ABTS⁺，能溶于水相或酸性乙醇介质中，在734nm处有最大吸收。被测物质加入 ABTS⁺溶液后，所含抗氧化成分能与ABTS⁺发生反应而使反应体系褪色。在734nm检测吸光度的变化 ,并以Trolox作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。
需自备的仪器和用品：
恒温水浴锅、低温离心机、酶标仪、96孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体120mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体24mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×2瓶，4℃避光保存。
样品的制备：
(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品
血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用EDTA抗凝）4℃ , 5000rpm 离心10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30 d）后再测定。
(2) 组织样品
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10的比例（建议称取约 0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
(3) 细胞样品
按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000 ：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液） ,冰浴超声波破碎（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
操作步骤：
1、分光光度计预热30min，调节波长至734nm。
2、工作液的配置：临用前取试剂二一瓶，加入25mL试剂一，震荡混匀20min后，静置，取上清使用。(注意，现配现用)
3、操作表(在EP管中反应)
测定步骤：
1、酶标仪预热30min，调节波长至734nm。
2、工作液的配置：临用前取试剂二一瓶，加入11mL试剂一，震荡混匀20min后，静置，取上清使用。（注意，现配现用）
3、操作表（在EP管中反应）
试剂名称(µL) | 空白管 | 测定管 |
提取液(μL) | 10 | |
样品(μL) | | 10 |
工作液(μL) | 190 | 190 |
充分混匀，10min内测定734nm吸光值，△A= A空白-A测定 |
注 意：空白管只需测定一次，吸取工作液时不要吸到底部沉淀，若A测定小于0.4，需用提取。
总抗氧化能力计算公式：
1、以自由基清除率表示：
ABTS自由基清除率(％)=(A空白-A测定)÷A空白×100%
2、以标准曲线上获得的抗氧化剂Trolox的量表示：
标准曲线：y= 0.7021x- 0.0012R²= 0.9985x:Trolox浓度(μmol/mL)y:吸光值差值△A
单位定义:以标准曲线上获得的抗氧化剂Trolox的量来表示样本的 ABTS自由基清除能力。
(1）按样本质量计算
总抗氧化能力(μmol Trolox/g鲜重)=(△A+0.0012)÷0.7021×V样÷(V样÷V样总×W)=1.424×(△A+0.0012）÷W
(2) 按样本蛋白浓度计算
总抗氧化能力(μmol Trolox/mg prot)=(△A+0.0012)÷0.7021×V样÷(V样÷V样总×Cpr)=1.424×(△A+0.0012)÷Cpr
(3) 按细胞计算
总抗氧化能力(μmol Trolox/104cell)=(△A+0.0012)÷0.7021×V样÷（V样÷V样总×细胞数量(万个)= 1.424×(△A+0.0012)÷细胞
数量(万个）
(4) 按液体体积计算
总抗氧化能力(μmol Trolox/mL)=(△A+0.0012)÷0.7021 =1.424×(△A+0.0012）V样总：加入提取液体积，1 mL；V样：反应中
样品体积，10μL；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。
注意事项：
1、尽量避免使用在中碱性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。
2、样品中不宜添加Tween、Triton和NP-40等去垢剂和DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。
